[发明专利]一种墨兰SSR引物组及应用该引物组构建墨兰品种指纹图谱的方法

说明书

本发明公开了一种墨兰SSR引物组及应用该引物组构建墨兰品种指纹图谱的方法。该墨兰SSR引物组包括14对SSR引物序列。本发明利用该14对SSR引物序列对墨兰基因组DNA进行多重PCR扩增，利用毛细管荧光电泳检测PCR产物，对SSR标记数据进行分析，构建70种墨兰SSR指纹图谱，并能够有效的鉴定出墨兰品种。本发明构建墨兰品种指纹图谱的方法具有高通量、高精度、成本低的优点，应用前景良好。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种墨兰SSR引物组及应用该引物组构建墨兰品种指纹图谱的方法。

背景技术

兰科植物在全球分布广泛，有801属，超27500种。近年来，分子标记，主要包括RAPD、 ISSR、SSR、SRAP和ScoT等广泛用于兰花种内、种间及品种间的分类鉴定、遗传多样性、亲缘关系的分析以及种质资源与种群方面的研究。如叙利亚研究者利用CAPS分子标记对34 种兰科植物进行鉴定，结果表明供试材料多态性极高，除晚蜘蛛兰(Ophrysfuciflora)等5个种外，其他种均能被鉴别出来。巴西研究者采用9个新的微卫星标记对分布在巴西海岸大西洋雨林中的两个美洲石斛(Epidendrum fulgens)种群进行了研究。针对我们原产的兰花，前人利用SCAR分子标记对兜兰属(Paphiopedilum)三个种及其杂交种进行鉴定，并开发了有效的特异性标记；利用SRAP分子标记对中国5个省份的31种石斛属(Dendrobium)植物进行分子鉴定，并获得了18个物种特异性标记；利用EST-SSR分子标记研究了129个春兰(Cymbidium goeringii)品种，发现相同园艺类型的品种具有公共的等位基因；利用ISSR分子标记技术对野生和栽培天麻(Gastrodia)居群、对春兰、春剑等16种兰属(Cymbidium)植物，对野生白及属(Bletilla)植物、对6个种群的无距虾脊兰(Calanthetsoongiana)植物、对扇脉杓兰(Cypripedium japonicum)的5个种群等等分别开展了遗传多样性、亲缘关系、种群结构的相关研究。然而，目前分子标记技术主要应用于对兰科植物的种类或品种进行亲缘关系、遗传关系上的区分，尚未形成比较全面的分子分类系统，能够直接应用于育种选择的可操作性较低。

墨兰(Cymbidium sinense)又名报岁兰，是兰科兰属地生种。株型高大、叶姿优美，总状花序具10-20朵花，有国兰幽香，是我国传统名贵年宵花卉，在国内外市场深受欢迎。尽管墨兰拥有悠久栽培历史和文化传承，但品种鉴定大多取决于传统形态指标，在尚未开花的时候难以通过叶片和株型精准鉴定品种。近年来，随着墨兰的推广和市场发展壮大，加之互联网技术的迅速发展，各大电商平台、社交媒体和论坛提供了更加多样化的交易渠道，兰花市场上出现的墨兰品种超500种，然而尚无统一规范的品种鉴定标准，产品以次充好，品种混淆的现象普遍存在。为促进适应市场需求的品种选育、鉴定和推广，势必要求建立与之相适应的兰花品种鉴定标准。因此，开展墨兰品种鉴定工作对于种质资源鉴评、种质创新利用以及商品花质量监督和市场规范等方面具有重要意义。目前，在国内还未见基于毛细管电泳技术和SSR分子标记对墨兰品种进行高通量鉴定的相关报道。

发明内容

本发明旨在针对现有技术的技术缺陷，提供一种墨兰SSR引物组及利用该引物组、将毛细管电泳技术与SSR-PCR技术结合的构建墨兰品种指纹图谱的方法，以快速高效鉴定墨兰品种。

本发明的第一个目的是提供一种墨兰SSR引物组，其包括以下14对SSR引物序列：

本发明的第二个目的是提供上述的墨兰SSR引物组在构建墨兰品种指纹图谱中的应用。

本发明的第三个目的是提供上述的墨兰SSR引物组在鉴定墨兰品种中的应用。

本发明的第四个目的是提供一种墨兰品种指纹图谱的构建方法，其包括以下步骤：

(1)提取墨兰样品的DNA；