[发明专利]利用木粉混合固态发酵生产真菌水溶性红色素的方法

权利要求书

1.一种利用木粉混合固态发酵生产真菌水溶性红色素的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将泡桐和甘蔗渣切成长宽为1-2cm，厚度为1-2mm的木片，放至102℃烘箱中烘干至恒重，然后将木片粉碎，再用100目筛网进行筛虑，将筛出的木粉放入储存罐中，然后用高压灭菌锅于121℃、0.1MPa下固体灭菌40min，冷却后得到预处理木粉；

(2)将菌种活化，用接种铲挑取梨孢假壳科(Arthroinium phaeospermum)SHL-1真菌菌块接种于PDA培养基中，封口后置于20±2℃的恒温恒湿培养箱中黑暗培养14天，菌丝布满90mm培养皿后将培养皿放入4℃冰箱中作为实验菌种，该菌株于2018年12月17日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC No：M 2018900，保藏地址：武汉市武昌珞珈山武汉大学；

(3)按照一定的浓度和配比分别称取泡桐和甘蔗渣粉末，加入至锥形瓶中，再向锥形瓶中倒入PDA培养基中，混合均匀后，封口，用高压灭菌锅于121℃、0.1MPa下液体灭菌20min，冷却至80℃，在超净工作台中用无菌注射器将摇晃均匀的培养基按20mL/皿的量移至90mm培养皿中，冷却30min后得到木粉混合培养基；

(4)在超净工作台中用打孔器将步骤(2)中的菌种打出直径为6mm的菌饼，然后用接种针将菌饼接种至(3)中所述的木粉混合培养基中心，封口后置于20±2℃的恒温恒湿培养箱中黑暗培养发酵14天；

(5)将步骤(4)中发酵结束的培养基切成1cm²小块，倒入烧杯中，按照蒸馏水：培养基＝3:1的液料比加入蒸馏水，保鲜膜封口后将烧杯放至超声清洗机中60℃超声提取30min，提取两次，然后用0.22μm滤膜过滤，装瓶放至-60℃冰箱冷冻24h，然后连续冷冻干燥36h，得到水溶性红色素粉末。

2.根据权利要求1所述利用木粉混合固态发酵生产真菌水溶性红色素的方法，其特征在于，步骤(1)中所述泡桐为产自山东菏泽的泡桐边材，甘蔗渣为广西产的黑甘蔗榨去糖分和甘蔗皮后剩下的白色甘蔗渣。

3.根据权利要求1所述利用木粉混合固态发酵生产真菌水溶性红色素的方法，其特征在于，步骤(2)中所用PDA培养基在使用时按照46.1g/L的比例将PDA粉末与去离子水混合并煮沸，高温灭菌后使用。

4.根据权利要求1所述利用木粉混合固态发酵生产真菌水溶性红色素的方法，其特征在于，步骤(3)中木粉在培养基中的浓度为3～5mg/mL,泡桐和甘蔗渣粉末浓度配比为3mg/mL+3mg/mL～5mg/mL+5mg/mL，木粉混合培养基在灭菌之前混合均匀至木粉完全悬浮于PDA培养基内。

5.根据权利要求1所述利用木粉混合固态发酵生产真菌水溶性红色素的方法，其特征在于，步骤(4)中打孔器和接种针用酒精灯烧红并冷却至常温后使用，接种时将菌饼中带有菌丝的一面朝下进行接种，全程在超净工作台中进行。

6.根据权利要求1所述利用木粉混合固态发酵生产真菌水溶性红色素的方法，其特征在于，步骤(5)中色素提取液冷却后再进行过滤，冷冻时色素溶液是装在20mL样品瓶中，每瓶色素溶液不超过10mL。

7.根据权利要求2所述利用木粉混合固态发酵生产真菌水溶性红色素的方法，其特征在于，超净工作台在紫外灭菌30min后使用。