[发明专利]共表达延胡索酸水合酶的嵌合抗原受体及其应用

权利要求书

1.一种嵌合抗原受体(CAR)，其包含胞外结构域、跨膜结构域和胞内结构域，其中所述嵌合抗原受体还表达延胡索酸水合酶FH(Fumarate hydratase)。

2.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其中所述延胡索酸水合酶FH在所述胞外结构域的N端或C端和/或在所述胞内结构域的N端或C端表达。

3.根据权利要求1或2所述的嵌合抗原受体，其中所述胞外结构域包含抗原识别结构域(scFv)和铰链区，所述胞内结构域包含共刺激结构域和/或信号转导结构域，优选地所述嵌合抗原受体还包含信号肽、小分子标签(优选Strep II)、自剪切肽或它们的组合，更优选地：

1)所述抗原识别结构域(scFv)特异性识别CD19、CD20、CD22、CD30、CD33、CD133、CD138、BCMA、CEA、EGFR、EGFRvIII、EphA2、EpCAM、GD2、GPC3、HER2、MSLN、MG7、MUC1、NY-ESO-1、LMP1、PSMA、Fra、NKG2D1、BCMA、IL13Rα2、LeY、CD70、B7-H3、ROR1或PSCA；

2)所述铰链区来源于IgG的铰链或CD8α/CD28胞外区；

3)所述跨膜结构域来源于CD4、CD8α、CD28或CD3ζ；

4)所述共刺激结构域来源于CD28受体家族(CD28，ICOS)或肿瘤坏死因子受体家族(4-1BB、OX40、CD27)；和/或

5)所述信号转导结构域为T细胞受体TCR/CD3ζ链或免疫球蛋白Fc受体FcεRIγ链。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述嵌合抗原受体从N端至C端依次包含信号肽、单链抗体ScFv(优选靶向CD19)、StrepII、CD8铰链区、CD28跨膜区、CD28胞内结构域、胞内共刺激域4-1BB和CD3ζ链、P2A肽和FH。

5.编码根据权利要求1-4中任一项所述的嵌合抗原受体的重组载体和/或分离的多核苷酸，优选所述载体是转座子载体、逆转录病毒载体、DNA载体、质粒、RNA载体、腺病毒载体、腺病毒相关载体、慢病毒载体或其任何组合。

6.一种嵌合抗原受体免疫细胞，其过表达延胡索酸水合酶FH。

7.根据权利要求6所述的嵌合抗原受体免疫细胞，其表达根据权利要求1-4中任一项所述的嵌合抗原受体或根据权利要求5所述的重组载体和/或分离的多核苷酸；或其中在不同的表达载体中分别表达嵌合抗原受体和延胡索酸水合酶FH。

8.根据权利要求6或7所述的嵌合抗原受体免疫细胞，其中所述免疫细胞是自体或同种异体的T细胞、肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)、NK细胞、表达TCR的细胞、树突状细胞或NK-T细胞，优选CAR T细胞。

9.一种药物组合物或试剂盒，其包含根据权利要求1-4中任一项所述的嵌合抗原受体、根据权利要求5所述的重组载体和/或分离的多核苷酸、或根据权利要求6-8中任一项所述的嵌合抗原受体免疫细胞。

10.一种治疗有需要的受试者中的疾病或病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用根据权利要求6-8中任一项所述的嵌合抗原受体免疫细胞或根据权利要求9所述的药物组合物，优选所述疾病或病症是癌症，更优选是CD4⁺、CD8⁺和/或CD19⁺的癌症，最优选是B细胞急性淋巴母细胞白血病(BALL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、B细胞淋巴瘤或其他淋巴恶性肿瘤、肝癌、胰腺癌、脑癌、乳腺癌、卵巢癌、结直肠癌、急性髓性白血病(AML)、多发性骨髓瘤、肺癌、胃癌、胶质瘤、EGFR-阳性实体瘤、胶质母细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤、鼻咽癌、食管癌、前列腺癌、神经母细胞瘤、肝细胞癌、鳞状细胞肺癌、MSLN-阳性实体瘤、非小细胞肺癌(NSCLC)、三阴性乳腺癌(TNBC)、肉瘤、晚期实体瘤、肾细胞癌或中枢神经系统癌。

11.降低细胞中延胡索酸生成的试剂(例如，延胡索酸水合酶FH)在制备抗肿瘤药物中的应用，优选所述肿瘤是CD4⁺、CD8⁺和/或CD19⁺的癌症，最优选是B细胞急性淋巴母细胞白血病(BALL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、B细胞淋巴瘤或其他淋巴恶性肿瘤、肝癌、胰腺癌、脑癌、乳腺癌、卵巢癌、结直肠癌、急性髓性白血病(AML)、多发性骨髓瘤、肺癌、胃癌、胶质瘤、EGFR-阳性实体瘤、胶质母细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤、鼻咽癌、食管癌、前列腺癌、神经母细胞瘤、肝细胞癌、鳞状细胞肺癌、MSLN-阳性实体瘤、非小细胞肺癌(NSCLC)、三阴性乳腺癌(TNBC)、肉瘤、晚期实体瘤、肾细胞癌或中枢神经系统癌；优选地，所述药物在CAR T细胞疗法中使用，或者与另一种抗肿瘤药物和/或CAR T细胞药物/疗法联用。