[发明专利]基于miRNA特征标记的肝癌早期检测

说明书

一种用于肝癌早筛的miRNA特征标记检测方法以及相应的用于肝癌检测的试剂盒。其检测的miRNA包括选自hsa‑miR‑33B‑3p，hsa‑miR‑92B‑3p，hsa‑miR‑205‑5p，hsa‑miR‑374C‑5p，hsa‑miR‑4516‑3p，和hsa‑miR‑6803‑3p的一种或多种miRNA，检测的样本包括组织样本和血浆样本。

技术领域

本发明涉及一种基于miRNA特征标记的肝癌检测方法，以及相应的用于肝癌检测的试剂盒，可用于肝癌的筛查。

背景技术

肝癌被誉为“癌中之王”，是最常见的恶性肿瘤之一。中国每年新发肝癌患者约占全球一半以上，死亡率在所有恶性肿瘤中位列第二位，严重威胁人民的生命和健康。肝癌起病非常隐匿，早期无明显症状。约80％的肝癌患者首诊就已进入中晚期，5年生存率几乎为零，而早期肝癌患者经过治疗，5年生存率可达60％以上。因此，早诊早治是对抗肝癌的重要手段。甲胎蛋白(Alpha fetoprotein，AFP)作为一种血清标志物，是诊断肝癌的常用指标。然而，AFP检测的灵敏度较低，仅有60％-70％的早期肝癌患者AFP值呈阳性。同时，常规的影像学检查，如B超和CT难以发现肿瘤直径小于2cm或密度近似肝实质的早期肝癌。因此，早期肝癌诊断仍面临较高的假阴性率及漏诊率。

因此，各国学者们从来没有停止过寻找新的更好的肝癌标志物的脚步。理想的肿瘤标志物需要有较高的特异性，能够将肝癌与肝硬化、肝炎、肝脏再生结节等区别开来；同时还需较高的敏感性，能够在肝癌早期提示诊断，且有易检测、可重复、侵入少的特点。

随着科学的发展和进步，以液体活检(Liquid biopsy)这种侵入式小、灵敏度高的肿瘤诊断技术应运而生。其中，循环miRNA分子标志物检测己被写入2019版《原发性肝癌诊疗规范》，并被纳入肝癌早期检测和诊断临床应用。

微小核糖核酸(microRNA，miRNA)是一种单链的、长度较短的内源性非编码RNA，己被确认可以广泛参与调节细胞生长和发育、分化、凋亡等生命活动，并能积极影响肿瘤的发生和发展。研究表明，约1/3以上的人类基因直接受到miRNA的调控作用，其生物学效应是阻遏或降解mRNA靶标转录和翻译成相应的蛋白质，进而参与生命活动的进程。其中，外周血中循环的、游离的miRNAs常以核酸.蛋白质复合物等形式稳定地存在于血液中，并可耐受反复冻融和极端pH环境。因此，这些因素决定了其不易降解的生物学特性。miRNAs在消化系统中的作用涉及发育、老化、分泌、代谢、病毒感染、免疫反应、肿瘤等等方面。

发明内容

具体地，本发明通过如下各项技术方案解决现有技术中存在的技术问题。

1.一种用于肝癌检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含用于检测选自hsa-miR-33B-3p，hsa-miR-92B-3p，hsa-miR-205-5p，hsa-miR-374C-5p，hsa-miR-4516-3p，和hsa-miR-6803-3p的一个或多个miRNA的检测试剂。

2.根据项1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含用于检测选自hsa-miR-33B-3p，hsa-miR-92B-3p，hsa-miR-205-5p，hsa-miR-374C-5p，hsa-miR-4516-3p，和hsa-miR-6803-3p的至少两个miRNA的检测试剂。

3.根据项1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含用于检测选自hsa-miR-33B-3p，hsa-miR-92B-3p，hsa-miR-205-5p，hsa-miR-374C-5p，hsa-miR-4516-3p，和hsa-miR-6803-3p的至少三个miRNA的检测试剂。

4.根据项1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含用于检测选自hsa-miR-33B-3p，hsa-miR-92B-3p，hsa-miR-205-5p，hsa-miR-374C-5p，hsa-miR-4516-3p，和hsa-miR-6803-3p的至少四个miRNA的检测试剂。