[发明专利]一种眼镜科蛇毒素和蝰科蛇毒素的检测方法及应用

权利要求书

1.一种眼镜科蛇毒素和蝰科蛇毒素的检测方法，其特征在于：

（1）利用SVSP嵌合体和Disintegrin嵌合体的混合物、3FT嵌合体的两种抗原免疫所得的抗体，可以有效鉴定眼镜科蛇毒素和蝰科蛇毒素；

（2）利用multicinctus 3FT嵌合体、Atra 3FT嵌合体的两种抗原免疫所得的抗体，可以有效鉴定眼镜科蛇毒素和银环蛇蛇毒素；

（3）运用阳离子交换层析法富集样本中的蛇毒，提高了血液、组织液中待测蛇毒的灵敏度；

（4）首次建立了眼镜蛇和银环蛇蛇毒标准品。

2.根据权利要求1所述的一种眼镜科蛇毒素和蝰科蛇毒素的检测方法，其特征在于：所述的检测方法适用于ELISA法、胶体金检测卡法、化学发光法和荧光法。

3.根据权利要求1所述的一种眼镜科蛇毒素和蝰科蛇毒素的检测方法，其特征在于：所述的SVSP嵌合体、Disintegrin嵌合体、3FT嵌合体、multicinctus 3FT嵌合体及Atra 3FT嵌合体的制备方法，具体流程如下：

S1，根据四种蝰科毒蛇蛇毒和四种眼镜科蛇蛇毒进行进化树及线性表位预测，获得重组抗原；

S2，将重组抗原，通过与多肽串联、基因合成并转入大肠杆菌BL₂₁（DE）₃中，制备获得SVSP嵌合体、Disintegrin嵌合体、3FT嵌合体、multicinctus 3FT嵌合体、Atra 3FT嵌合体；

S3，将步骤S2中的5种嵌合体，制备成4种抗体。

4.根据权利要求3所述的一种眼镜科蛇毒素和蝰科蛇毒素的检测方法，其特征在于：所述的步骤S1的具体流程如下：

S1-1，四种蝰科毒蛇蛇毒在UniProtKB库中以SVSP作为关键词，获得若干蛋白序列；

S1-2，将S1-1的序列利用UniProtKB网站上的进化树工具分析；

S1-3，从中选取8条序列，在IDEB数据库中进行抗原预测，选取阈值大于0.5者且长度大于5aa者，为入选的SVSP序列及预测线性抗原表位；

S1-4，将S1-3中的线性抗原表位中，去除相同或者高相似序列，得到预测线性抗原表位汇总，获得氨基酸序列如SEQ ID NO:1~ SEQ ID NO:38所示；

S1-5，四种蝰科毒蛇蛇毒在UniProtKB库中以disintegrin作为关键词，获得若干蛋白序列；

S1-6，重复步骤S1-2~S1-4，获得氨基酸序列如SEQ ID NO:39~ SEQ ID NO:93所示；

S1-7，四种眼镜科蛇蛇毒在UniProtKB库中以three-finger toxin作为关键词，获得若干蛋白序列；

S1-8，重复步骤S1-2~S1-4，获得氨基酸序列如SEQ ID NO:94~ SEQ ID NO:135所示。