[发明专利]一种Bt杀虫蛋白对大型蚤安全性影响的评价方法

权利要求书

1.一种Bt杀虫蛋白对大型蚤安全性影响的评价方法，其特征在于：其包括以下步骤：

S1)获取大型蚤；

S2)配制受试溶液：分别配置受试杀虫蛋白溶剂溶液A、重铬酸钾溶液B和受试杀虫蛋白溶液C三种受试溶液；其中，所述受试杀虫蛋白溶剂溶液A为阴性对照组，所述重铬酸钾溶液B为阳性对照组，所述受试杀虫蛋白溶液C为处理组；

S3)配置大型蚤培养液：其包括取CaCl₂·2H₂O溶液D、MgSO₄·7H₂O溶液E、NaHCO₃溶液F、KCl溶液G四种储备液，充分混合，然后用蒸馏水稀释，得到大型蚤培养液；所述大型蚤培养液中，CaCl₂·2H₂O浓度为11.76g/L、MgSO₄·7H₂O浓度为4.93g/L、NaHCO₃浓度为2.59g/L、KCl浓度为0.25g/L；

S4)培养大型蚤：将步骤S1)中获取的大型蚤单只置于100mL小烧杯中，每器皿添加50mL所述大型蚤培养液，将步骤S2)中的每一种受试溶液作为一个处理，每个处理不少于30个大型蚤；测试过程中，每日添加斜生栅藻饵料至烧杯中，使斜生栅藻饵料在培养液中的浓度约为10⁵个/L，每天观察、记录试验蚤死亡头数、新生幼蚤数；新生幼蚤产出后，从试验器皿中移出；试验持续时间为21d，通过对比处理组和对照组大型蚤存活率、产新生幼蚤数等指标来评价Bt杀虫蛋白对大型蚤的影响。

2.如权利要求1所述的Bt杀虫蛋白对大型蚤安全性影响的评价方法，其特征在于：所述步骤S1)中的大型蚤选自培养3代以上遗传背景相同的6～24h孤雌生殖的幼蚤，该幼蚤20℃时重铬酸钾溶液的24h-EC₅₀为0.5～1.2mg/L。

3.如权利要求1所述的Bt杀虫蛋白对大型蚤安全性影响的评价方法，其特征在于：所述杀虫蛋白溶剂溶液A为灭菌蒸馏水或pH值为7.4的磷酸缓冲盐溶剂。

4.如权利要求1所述的Bt杀虫蛋白对大型蚤安全性影响的评价方法，其特征在于：所述重铬酸钾溶液B的配置方法为：准确称取设定剂量的重铬酸钾，使用纯蒸水溶解后定容。

5.如权利要求1所述的Bt杀虫蛋白对大型蚤安全性影响的评价方法，其特征在于：所述受试杀虫蛋白溶液C的配置方法为：将受试杀虫蛋白溶解或均匀悬浮于灭菌蒸馏水或pH值为7.4的磷酸缓冲盐溶剂中。

6.如权利要求1至5中任一项所述的Bt杀虫蛋白对大型蚤安全性影响的评价方法，其特征在于：所述大型蚤培养液的pH为7.8±0.2，硬度为250±25mg/L(以CaCO₃计)，Ca/Mg比例约为4:1，溶解氧浓度在空气饱和值的80％以上。

7.如权利要求6所述的Bt杀虫蛋白对大型蚤安全性影响的评价方法，其特征在于：测试时，将三种所述受试溶液分别添加至所述大型蚤培养液中，其中，所述重铬酸钾在所述大型蚤培养液中浓度为500μg/L，所述受试杀虫蛋白在所述大型蚤培养液中的浓度为大型蚤在自然条件下可能暴露的受试杀虫蛋白最高浓度的10倍以上。

8.如权利要求6所述的Bt杀虫蛋白对大型蚤安全性影响的评价方法，其特征在于：所述步骤S4)中大型蚤在培养温度为20±1℃，光周期为L:D＝16h:8h的恒温室内进行。

9.如权利要求8所述的Bt杀虫蛋白对大型蚤安全性影响的评价方法，其特征在于：所述恒温室内的光强为60μmol/m²·s。

10.如权利要求1所述的Bt杀虫蛋白对大型蚤安全性影响的评价方法，其特征在于：每隔2～3d更换所述大型蚤培养液。