[发明专利]一种检测肿瘤细胞或肿瘤细胞碎片的方法

说明书

本公开涉及一种检测肿瘤细胞或肿瘤细胞碎片的方法，所述方法包括采用组织非特异性碱性磷酸酶(TNAP)抑制剂。采用本公开的方法，可以使白细胞背景值成倍降低，肿瘤细胞的信号值不变或轻微降低，信噪比显著提升，提高肿瘤细胞检测灵敏度。

技术领域

本公开属于生物检测领域，具体涉及一种检测肿瘤细胞或肿瘤细胞碎片的方法，特别是通过增强检测信噪比来检测肿瘤细胞或肿瘤细胞碎片的方法。

背景技术

循环肿瘤细胞(circulating tumor cells，CTCs)是指由实体肿瘤上脱落下来进入血液或者淋巴系统的肿瘤细胞，其常游离于体液中，不仅包括血液，还有唾液、尿液、胸腹腔积液等(樊代明.整合医学.世界图书出版公司，2019.第198页)。外周血中的循环肿瘤细胞非常罕见，每毫升血约含有1～10个CTCs，CTC远低于血液中其他类型的细胞，数量的稀少使得血液CTC检测极具挑战性，加上CTC产生的复杂性、异质性，更增加了其检测的难度。由于其稀有性，大多数技术都需要在检测CTC之前进行富集步骤。这要求所用检测方法能高效准确地从大量非目标细胞中检测出极少的目标细胞。CTC检测技术包括CTC的富集(分离)和CTC的分析鉴定(检测)。

CTC的富集方法可以分为生物化学特性富集法(亲和性富集法)和物理特性富集法。亲和性富集法主要是根据通过细胞表面特异性表达的蛋白质生物标志物分离靶细胞，包括正向捕获CTC的阳性富集法和负向去除白细胞的阴性富集法。但是亲和性富集法需要用到大量抗体，成本较高。物理特性富集法主要是根据CTC的大小、密度、力学和介电性能等物理特性将CTC筛选出来。具体来说，CTC的可变形性不及血细胞。这些物理特性富集技术操作简单成本低廉，不依赖细胞表面抗原的表达，捕获的细胞数量多，但是由于CTC物理特性的异质性，难以富集到高纯度的CTC。

CTC的检测方法主要是免疫荧光，即以荧光物质标记抗体而进行肿瘤细胞的抗原定位，再通过用不同的荧光标记物标记不同的细胞进行计数，但是肿瘤患者血液样本中的CTC是稀有细胞，而白细胞的数量极多，导致背景高，加上肿瘤细胞的异质性，CTC的检测信号弱、效率不高、信噪比低。

胸腔积液和腹腔积液是肿瘤患者的常见临床表现，其主要成分均为从血管中渗入的细胞和蛋白质成分以及钠、钙等无机盐离子。不少癌症患者首诊已出现胸腔积液，原发性肝癌常并发恶性腹腔积液，细胞学诊断和肿瘤标志物测定是目前恶性胸腔积液最常用的诊断方法，但仍不能满足临床诊断的需要。

碱性磷酸酶(ALP或AKP)是广泛分布于人体肝脏、骨骼、肠、肾和胎盘等组织经肝脏向胆外排出的一种酶，可直接参与磷代谢，在钙、磷的消化、吸收、分泌及骨化的过程发挥了重要作用。碱性磷酸酶不是单一的酶，而是一组同工酶。目前己知人类同工酶包括：组织非特异性碱性磷酸酶(TNAP)，肠型碱性磷酸酶(IAP)，胎盘型碱性磷酸酶(PLAP)和类胎盘型碱性磷酸酶(GCAP)。正常人血清中的碱性磷酸酶主要来自肝和骨骼，碱性磷酸酶测定主要用于诊断肝胆和骨骼系统疾病，是反映肝外胆道梗阻、肝内占位性病变和佝偻病的重要指标。

碱性磷酸酶异源二聚体在结直肠癌、乳腺癌、肝细胞癌、宫颈癌等肿瘤组织中高表达。游离的碱性磷酸酶异源二聚体、含有碱性磷酸酶异源二聚体的外泌体或循环肿瘤细胞可以从原发性肿瘤或转移病灶释放到血流中。因此，检测游离的碱性磷酸酶异源二聚体、外泌体或循环肿瘤细胞将有助于肿瘤的早期诊断和筛查、监测术后患者肿瘤的复发与转移、评估抗肿瘤药物的敏感性与患者预后以及选择个体化治疗的策略。