[发明专利]一种鼠抗OXA-48型碳青霉烯酶杂交瘤细胞株，单克隆抗体及应用

说明书

本发明提供鼠抗OXA‑48型碳青霉烯酶杂交瘤细胞株，单克隆抗体及应用，通过小鼠杂交瘤单克隆抗体筛选及RT‑PCR法克隆Ig可变区基因，获得稳定分泌鼠抗OXA‑48型碳青霉烯酶抗体的杂交瘤细胞株及其可变区序列；通过系统性评价，鼠抗OXA‑48型碳青霉烯酶抗体在各方面均有较佳表现，效价达到了1:1280000以上，适合作为免疫诊断试剂用于制备碳青霉烯酶耐药菌株体外诊断试剂盒。

技术领域

本发明属于抗体制备技术领域，尤其是涉及一种鼠抗OXA-48型碳青霉烯酶杂交瘤细胞株，单克隆抗体及应用。

背景技术

碳青霉烯酶是一种β-内酰胺酶，有较高的水解碳青霉烯类抗生素的能力，按Ambler 分子结构分为A 类、B 类和D 类三类酶，A 类酶包括KPC，B 类酶包括NDM、IMP、VIM和GIM 等，D 类酶有OXA 等，其中OXA-48 型酶在碳青霉烯类耐药中显示出愈来愈重要的作用，在全球各地关于其在肠杆菌科耐药的报道日渐增多。2001 年Poirel L等发现了一种新型的β-内酰胺酶基因，即blaOXA-48 基因，该基因在一株几乎对所有β-内酰胺类药物耐药的肺炎克雷伯菌中发现。自OXA-48被发现以来，过去10余年中，产OXA-48 细菌在地中海地区的检出率不断增加，成为主要流行地区，随后OXA-48 在墨西哥、利比亚、埃及、突尼斯和印度等国家相继被报道，近几年，在美国和中国台湾也陆续出现。

实验室检测碳青霉烯酶的方法众多，主要包括改良Hodge试验、Carba NP试验、改良碳青霉烯灭活试验（modified carbapenem inactivation method，mCIM）、酶抑制剂增强试验、免疫金标试验以及分子生物学方法等。免疫诊断试剂是体外诊断试剂中发展最快的细分领域，利用抗原与抗体之间的特异性结合进行定性或定量检测。研发具有自主知识产权的碳青霉烯酶快速诊断产品对于耐药菌株的早期分型、指导用药，提高我国的医疗卫生水平具有重要意义。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供一种鼠抗OXA-48型碳青霉烯酶杂交瘤细胞株，单克隆抗体及应用。

本发明采用的技术方案是：一种鼠抗OXA-48型碳青霉烯酶杂交瘤细胞株，命名为IB5，保藏编号为CGMCC No.20284；或者命名为IH3，保藏编号为CGMCC No.20283。

一种鼠抗OXA-48型碳青霉烯酶抗体，抗体IB5，包括轻链可变区和重链可变区，轻链可变区包括如SEQ ID NO:1所示的CDRL1、SEQ ID NO:2所示的CDRL2和SEQ ID NO:3所示的CDRL3，重链可变区包括如SEQ ID NO:4所示的CDRH1、SEQ ID NO:5所示的CDRH2和SEQ IDNO:6所示的CDRH3；

SEQ ID NO:1 RASKSISKYLA（CDRL1）

SEQ ID NO:2 SGSTFQS（CDRL2）

SEQ ID NO:3 QQHNEYPYVT（CDRL3）

SEQ ID NO:4 GFTFSTYAMS（CDRH1）

SEQ ID NO:5 TISSGGSYTSYPDSVKG（CDRH2）

SEQ ID NO:6 RPEYAMDY（CDRH3）

或者，

抗体IH3，轻链可变区包括如SEQ ID NO:11所示的CDRL1、SEQ ID NO:12所示的CDRL2和SEQ ID NO:13所示的CDRL3，重链可变区包括如SEQ ID NO:14所示的CDRH1、SEQ IDNO:15所示的CDRH2和SEQ ID NO:16所示的CDRH3；

SEQ ID NO:11 RASKSVSTSGYSYMH（CDRL1）

SEQ ID NO:12 LVSNLES（CDRL2）

SEQ ID NO:13 QHIRELYT（CDRL3）

SEQ ID NO:14 GYTFTDYVIS（CDRH1）