[发明专利]一种辣椒外源ABA诱导型启动子、表达载体及其应用

说明书

本发明中公开了一种辣椒外源ABA诱导型启动子，所述启动子的核苷酸序列如SEQIDN0.1所示，所述启动子的核苷酸序列来源于辣椒CaRH33基因的上游启动子区。本发明同时公开了一种含有上述辣椒外源ABA诱导型启动子的表达载体。本发明还公开了上述ABA诱导型启动子和表达载体在转基因植物上的应用。本发明利用诱导型启动子CaRH33代替组成型启动子，连接目的基因，再接入到表达载体中，从而获得诱导型启动子的双元表达载体；利用遗传转化技术将其导入到植物的基因组中，可以实现对双元表达载体中目的基因的定向操作，获得可诱导表达目的基因的转基因植株，并显著提高植物在诱导条件下对外源基因的表达能力和表达稳定性。

技术领域

本发明涉及基因工程领域，具体涉及一种辣椒外源ABA诱导型启动子、表达载体及其应用。

背景技术

启动子是一段位于结构基因5'端上游区的DNA序列,在基因表达调控中起着重要作用。诱导型启动子，是一类受到诱导条件刺激下能大幅度快速调控转录活性的启动子。

植物的生长发育离不开环境，当光、温度、水分等环境因素发生变化时，植物通过一系列信号传递,环境响应启动子中相应的诱导顺式作用元件与转录因子结合后，诱导特定基因的转录表达，最后通过基因产物的作用对这些信号产生响应，具备了一定的环境适应能力，以维持正常的生命活动。

用胁迫诱导型启动子与特定基因融合，使植物在诱导条件下表达相应外源蛋白，可以显著提高作物在诱导条件下外源基因的表达能力，但是目前这种诱导型启动子的研究相对较少，其表达外源基因的效率也不高。

发明内容

本发明的目的在于解决现有技术中存在的在植物中表达外源基因的诱导型启动子的表达能力较低的问题，提供一种辣椒外源ABA诱导型启动子、表达载体及其应用，可以显著提高植物在诱导条件下外源基因的表达能力。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：一种辣椒外源ABA诱导型启动子，所述启动子的核苷酸序列如SEQ ID N0.1所示，所述启动子的核苷酸序列来源于辣椒CaRH33基因的上游启动子区。

优选地，扩增所述启动子的核苷酸序列的引物序列如SEQ ID N0.2和SEQ ID N0.3所示。

本发明同时提供了含有上述辣椒外源ABA诱导型启动子的表达载体。

优选地，所述表达载体还包含报告基因GUS；所述辣椒外源ABA诱导型启动子通过双酶切接入含有报告基因GUS的双元表达载体中，获得含有辣椒外源ABA诱导型启动子和报告基因GUS的表达载体；所述含有报告基因GUS的双元表达载体的核苷酸序列如SEQ IDN0.4所示。

进一步优选，所述表达载体为双元表达载体。

本发明还提供了上述辣椒外源ABA诱导型启动子在转基因拟南芥上的应用。

本发明还提供了上述表达载体在转基因拟南芥上的应用。

本发明克隆到了辣椒中与拟南芥AtRH33同源的基因CaRH33的启动子，并对其进行了序列分析及功能的验证，证实CaRH33启动子序列可由ATG上游约1.5kb的序列组成，该启动子不仅能够启动外源基因GUS在拟南芥中表达，并且在ABA处理后，可以使转基因植株颜色加深，证明CaRH33启动子是一种响应外源ABA诱导的启动子。本发明利用诱导型启动子CaRH33代替组成型启动子，连接目的基因，再接入到表达载体中，从而获得诱导型启动子的双元表达载体；利用遗传转化技术将其导入到植物拟南芥的基因组中，可以实现对双元表达载体中目的基因的定向操作，获得可诱导表达目的基因的转基因植株。因此，作为一个可异源表达的诱导型启动子，CaRH33启动子区域和上游调控序列，在基因工程以及实际应用方面有着非常重要的价值。