[发明专利]一种毒害艾美耳球虫SAG20抗原亚单位疫苗及其制备方法和应用在审
| 申请号： | 202210194522.4 | 申请日： | 2022-03-01 |
| 公开（公告）号： | CN114525287A | 公开（公告）日： | 2022-05-24 |
| 发明（设计）人： | 周德荣;谭志坚;刘叶萍;林瑞庆;翁亚彪;刘丽丹;刘园;邝春曼;尚志祥 | 申请（专利权）人： | 佛山市正典生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/30 | 分类号： | C12N15/30;C12N15/70;A61K39/012;A61P33/02 |
| 代理公司： | 北京品源专利代理有限公司 11332 | 代理人： | 潘登 |
| 地址： | 528138 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 毒害 艾美耳球虫 sag20 抗原 单位 疫苗 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码毒害艾美耳球虫SAG20蛋白；
所述核酸分子包括SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。
2.一种重组载体，其特征在于，所述重组载体包括至少一个拷贝的权利要求1所述的核酸分子；
优选地，所述重组载体的骨架包括pET-30a质粒。
3.一种毒害艾美耳球虫SAG20抗原亚单位疫苗，其特征在于，所述毒害艾美耳球虫SAG20抗原亚单位疫苗包括毒害艾美耳球虫SAG20蛋白，所述毒害艾美耳球虫SAG20蛋白为由权利要求2所述的重组载体诱导表达得到的重组蛋白。
4.根据权利要求3所述的毒害艾美耳球虫SAG20抗原亚单位疫苗，其特征在于，所述重组蛋白的浓度为0.1～3.0mg/mL。
5.根据权利要求3或4所述的毒害艾美耳球虫SAG20抗原亚单位疫苗，其特征在于，所述毒害艾美耳球虫SAG20抗原亚单位疫苗还包括佐剂；
优选地，所述佐剂包括完全弗氏佐剂或不完全弗氏佐剂；
优选地，所述佐剂与所述重组蛋白的质量比为1:(0.5～3.0)。
6.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括权利要求3～5中任一项所述的毒害艾美耳球虫SAG20抗原亚单位疫苗。
7.一种权利要求3～5中任一项所述的毒害艾美耳球虫SAG20抗原亚单位疫苗的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：
(1)构建权利要求2所述的重组载体；
(2)将步骤(1)所述的重组载体转入感受态细胞中，筛选阳性克隆后进行培养，裂解细胞，得到裂解液；
(3)从步骤(2)所述的裂解液中提取和纯化蛋白质，得到所述重组蛋白；
(4)将步骤(3)所述的重组蛋白与佐剂混合，得到所述毒害艾美耳球虫SAG20抗原亚单位疫苗。
8.根据权利要求7所述的毒害艾美耳球虫SAG20抗原亚单位疫苗的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述重组载体的构建方法包括如下步骤：
将编码毒害艾美耳球虫SAG20蛋白的核酸分子插入pET-30a质粒的NdeⅠ和HindⅢ酶切位点之间，构建重组质粒pET-30a-SAG20。
9.根据权利要求7或8所述的毒害艾美耳球虫SAG20抗原亚单位疫苗的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述感受态细胞包括BL21感受态细胞；
优选地，步骤(2)中，所述裂解细胞的方法包括超声破碎；
优选地，步骤(3)中，所述提取和纯化采用如下步骤进行：
将所述裂解液离心收集上清液，并对所述上清液进行过滤，将过滤后的上清液加入活化后的固定层析柱中，加入洗脱液，收集目标蛋白。
10.权利要求1所述的核酸分子、权利要求2所述的重组载体、权利要求3～5中任一项所述的毒害艾美耳球虫SAG20抗原亚单位疫苗、权利要求6所述的药物组合物或权利要求7～9中任一项所述的毒害艾美耳球虫SAG20抗原亚单位疫苗的制备方法中任意一种或至少两种的组合在制备球虫病治疗药物和/或疫苗中的应用。
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