[发明专利]一种用于治疗退行性颈椎病的自体脂肪源干细胞的提取方法

权利要求书

1.一种用于治疗退行性颈椎病的自体脂肪源干细胞的提取方法，其特征在于：包括以下步骤：

S1、在无菌环境下，选择患者机体一处部位作为抽取脂肪的部位并进行标记，用较小的手术刀沿着皮肤切口的方向插入皮下脂肪组织，提取腹部皮下正常脂肪组织，清除明显的结缔组织及肉眼可见的小血管，用PBS缓冲液清洗3-5遍脂肪组织，再将其置于PBS缓冲液中用灭菌剪将脂肪组织进行剪碎处理，得到脂肪小块；

S2、将脂肪小块置于500mL生理盐水中，静置10-15min，排出最下层，然后将剩余液体转移至50mL离心管，置于冷冻高速离心机中进行离心，离心结束后取上层，得到脂肪颗粒；

S3、使用浓度为0.1％的胶原酶Ⅰ对脂肪颗粒处理，得到细胞溶液，然后通过差数离心机对其进行提取，得到细胞组织液；

S4、然后将细胞组织液放置到培养皿中，通过加入培养液和诱导基因进行原代培养和传代培养；

S5、将培养后的干细胞保存在低温室内，将温度设置为4℃，从而方便后续的使用。

2.根据权利要求1所述的一种用于治疗退行性颈椎病的自体脂肪源干细胞的提取方法，其特征在于：所述步骤S4原代培养和传代培养的培养基采用DMEM/F12基础培养基，并添加ITS、青霉素和链霉素，并且ITS、青霉素和链霉素的添加量分别为5ng/ml、100u/ml和100u/m。

3.根据权利要求1所述的一种用于治疗退行性颈椎病的自体脂肪源干细胞的提取方法，其特征在于：所述步骤S3中胶原酶Ⅰ的温度设置在人体生存的最适温度36℃-37℃，酶解处理时间为6～8小时。

4.根据权利要求1所述的一种用于治疗退行性颈椎病的自体脂肪源干细胞的提取方法，其特征在于：所述步骤S1中PBS缓冲液为浓度0.05％-2％的Triton X-100或TritonX-200的PBS缓冲液。

5.根据权利要求1所述的一种用于治疗退行性颈椎病的自体脂肪源干细胞的提取方法，其特征在于：所述步骤S2中冷冻高速离心机在进行启动后，保证在温度4℃，转速1000-1200r/min条件下，离心5min。

6.根据权利要求1所述的一种用于治疗退行性颈椎病的自体脂肪源干细胞的提取方法，其特征在于：所述步骤S3中差数离心机在进行离心的时候，保证离心转速为1000-1200r/min，其中温度保证在人体生存的最适温度36℃-37℃。

7.根据权利要求1所述的一种用于治疗退行性颈椎病的自体脂肪源干细胞的提取方法，其特征在于：培养皿内的环境温度保证在人体生存的最适温度36℃-37℃，200rpm，培养时间为2-3天。

8.根据权利要求1所述的一种用于治疗退行性颈椎病的自体脂肪源干细胞的提取方法，其特征在于：所述步骤S1、步骤S2、步骤S3、步骤S4、步骤S5均在无菌条件下进行，步骤S1所述患者机体一处部位包括上臂、腹部以及大腿内侧任意一处。