[发明专利]一种检测菌体中活菌数和/或死菌数的方法在审
| 申请号： | 202210196921.4 | 申请日： | 2022-03-02 |
| 公开（公告）号： | CN114480556A | 公开（公告）日： | 2022-05-13 |
| 发明（设计）人： | 于洁;孙志宏;包秋华;钟智 | 申请（专利权）人： | 内蒙古农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/06 | 分类号： | C12Q1/06;G01N15/14;C12R1/245;C12R1/25;C12R1/225 |
| 代理公司： | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人： | 苏士莹 |
| 地址： | 010018 内蒙古自治区呼和*** | 国省代码： | 内蒙古;15 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 菌体 中活菌数 死菌数 方法 | ||
1.一种检测菌体中活菌数和/或死菌数的方法，其特征在于，包括以下步骤：
将菌体稀释至菌体数量为107cfu/mL数量级后，得到菌悬液；
将所述菌悬液进行荧光染色；所述荧光染色剂包括SYTO9染料和PI染料；
将荧光染色后的菌体与等体积的绝对计数微球混合，得到混合物；
检测混合物中的SYTO9染色菌数和PI染色菌数以及绝对计数微球数，根据式Ⅰ和/或式Ⅱ计算菌体中活菌数和/或死菌数；
活菌数＝(SYTO9染色阳性和PI染色阴性的菌数/绝对计数微球数)×绝对计数微球数浓度×稀释倍数，式Ⅰ；
死菌数＝(PI染色阳性和SYTO9染色阴性的菌数/绝对计数微球数)×绝对计数微球数浓度×稀释倍数，式Ⅱ。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述SYTO9染料的使用浓度为0.5mmol/L，所述PI染料的使用浓度为0.1～0.15mg/mL；
所述SYTO9染料、PI染料和菌悬液的体积比为5:2:1000。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，对所述菌悬液进行荧光染色的时间为15min。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述检测混合物中的SYTO9染色菌数和PI染色菌数所使用的仪器包括流式细胞分析仪。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述流式细胞分析仪包括MoFloAstriosEQ超速流式细胞分析仪；所述流式细胞分析仪的设置参数包括：读取微粒总个数为500000个，SYTO绿光通道增益为200，PI红光通道增益为2000。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述菌体的活菌数≥106cfu/mL或106cfu/g。
7.根据权利要求1或6所述的方法，其特征在于，所述菌体包括乳酸菌。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述乳酸菌包括乳杆菌。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述乳杆菌包括副干酪乳杆菌、植物乳杆菌和发酵乳杆菌。
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