[发明专利]用于制备褐藻寡糖的褐藻胶裂解酶及其用途在审
| 申请号： | 202210199877.2 | 申请日： | 2022-03-02 |
| 公开（公告）号： | CN114457062A | 公开（公告）日： | 2022-05-10 |
| 发明（设计）人： | 刘晓勇;沐万孟;张文立;徐炜;王鑫绣;王伶秀 | 申请（专利权）人： | 山东海之宝海洋科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/88 | 分类号： | C12N9/88;C12N15/60;C12N15/70;C12N1/21;C12P19/12;C12P19/00;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京汇知杰知识产权代理有限公司 11587 | 代理人： | 杨巍;柴春玲 |
| 地址： | 264300 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 制备 褐藻 寡糖 裂解 及其 用途 | ||
1.具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的蛋白质用作褐藻胶裂解酶的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其中，所述蛋白质由SEQ ID NO:2所示的核酸序列编码。
3.根据权利要求1或2所述的用途，其中，所述蛋白质是通过重组表达获得的，例如所述蛋白质为存在于重组细菌如大肠杆菌的全细胞培养液中的形式。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的用途，其中，所述蛋白质作为褐藻胶裂解酶的酶活力为120U/mg至130U/mg，例如为125.7U/mg。
5.一种由褐藻酸盐酶解制备褐藻寡糖的方法，包括以下步骤：使包含作为褐藻胶裂解酶的具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的蛋白质和褐藻酸盐的反应体系在45℃至65℃、优选为50℃至60℃、更优选为45℃至55℃的温度反应例如至少3小时、优选至少5小时、例如6-8小时。
6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述褐藻胶裂解酶在反应体系中的浓度为3μg/mL至5μg/mL，优选为4μg/mL；并且其中，所述褐藻酸盐在反应体系中的浓度以重量计为0.3％至0.4％，优选为0.35％。
7.根据权利要求5或6所述的方法，其中，所述反应体系被调节至pH为7至9，优选7至8，更优选为7.5；优选地，采用Tris-HCl缓冲液来调节所述反应体系的pH。
8.根据权利要求5-7中任一项所述的方法，其中，所述蛋白质由SEQ ID NO:2所示的核酸序列编码，优选地通过重组表达获得的，并且任选地，所述蛋白质为存在于重组细菌如大肠杆菌的全细胞培养液中的形式。
9.根据权利要求5-8中任一项所述的方法，其中，所述蛋白质作为褐藻胶裂解酶的酶活力为120U/mg至130U/mg，例如为125.7U/mg。
10.根据权利要求5-9中任一项所述的方法，其中，所述褐藻酸盐是褐藻酸钠、褐藻酸钾、褐藻酸钙，优选为褐藻酸钠，所述褐藻酸盐例如来源于海带加工用水。
11.根据权利要求5-10中任一项所述的方法，其中，通过所述方法能够获得聚合度为2-4的褐藻寡糖。
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