[发明专利]黑素瘤细胞株及其制备方法

权利要求书

1.黑素瘤细胞株，其特征在于，黑素瘤细胞株内含有Rosa26-Stop-tdTomato基因、Tyr-creER^T2基因、Braf^V600E和Pten^f/f基因，所述黑素瘤细胞株的分类命名为小鼠黑素瘤细胞株ATBP，已于2022年2月9日将该细胞株保藏至中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCCNO:C202233。

2.根据权利要求1所述的黑素瘤细胞株的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、选取同时携带Tyr-creER^T2、Braf^V600E、Pten^f/f基因的小鼠A，以及携带Rosa26-Stop-tdTomato基因的小鼠B，将所述小鼠A和所述小鼠B进行杂交，筛选得到携带Rosa26-Stop-tdTomato、Tyr-creER^T2、Braf^V600E、Pten^f/+基因的小鼠C；

S2、将所述小鼠C饲养至成年后与携带Pten^f/f基因的小鼠D进行杂交，筛选得到携带Rosa26-Stop-tdTomato、Tyr-creER^T2、Braf^V600E、Pten^f/f基因的小鼠E；

S3、通过对所述小鼠E进行诱导得到Rosa26-Stop-tdTomato表达、Tyr-creER^T2激活、Braf^V600E激活同时Pten基因缺失的小鼠F，所述小鼠F中即含有Rosa26-Stop-tdTomato、Tyr-creER^T2、Braf^V600E同时缺失Pten基因的黑素瘤细胞株。

3.根据权利要求2所述的黑素瘤细胞株的制备方法，其特征在于，步骤S3中使用4羟基他莫昔芬对所述小鼠E进行诱导。

4.根据权利要求2所述的黑素瘤细胞株的制备方法，其特征在于，步骤S3中在对所述小鼠E诱导之前将其背部的毛剔除。

5.根据权利要求2所述的黑素瘤细胞株的制备方法，其特征在于，步骤S3中对所述小鼠E的诱导时间为30天。

6.根据权利要求2所述的黑素瘤细胞株的制备方法，其特征在于，在制备步骤S1中的所述小鼠A时，先选取含有Tyr-creER^T2基因的小鼠G，以及含有Braf^V600E和Pten^f/f基因的小鼠H进行杂交，即可筛选得到所述小鼠A。

7.根据权利要求6所述的黑素瘤细胞株的制备方法，其特征在于，制备所述小鼠G时，选取FVB/NJ小鼠，通过转基因显微注射技术将融合基因注射到该小鼠的受精卵细胞内，构建出所述小鼠G。