[发明专利]一种受二十二碳六烯酸调控的microRNA及其应用

说明书

本发明公开了一种受二十二碳六烯酸调控的microRNA及其应用，属于分子生物学技术领域。二十二碳六烯酸具有减轻氧化应激引起的肝脏损伤作用，但目前早期如何快速准确评价二十二碳六烯酸对于肝脏损伤的保护作用有待建立。本发明以microRNA miR‑101‑3p作为二十二碳六烯酸保护肝脏损伤的早期分子检测标志物，实现了在肝脏损伤早期快速、准确评估二十二碳六烯酸对肝脏损伤的保护作用。在拓展microRNA miR‑101‑3p应用方向的同时也为二十二碳六烯酸保护肝脏损伤的评价方法的建立提供依据。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种受二十二碳六烯酸调控的microRNA及其应用。

背景技术

引起肝损伤的原因一般包括感染、自身免疫、药物及毒物、酒精因素、遗传代谢，以及继发于其他系统疾病的肝损伤。近年来人们生活方式的多样化及周围环境等影响，导致多种因素的叠加、疾病谱的变化，以及疑难肝病的发病数量逐渐增加。不同病因引起的肝损伤临床表现多种多样，实验室检查、影像学检查缺乏特异性，在诊断肝损伤病因方面难度也增加。

氧化应激是诱发肝脏损伤的重要因素之一。氧化应激是由于体内氧化系统与抗氧化系统作用失衡，使体内产生过多的高活性分子，如活性氧（ROS）等，从而对组织造成损伤。过氧化氢是活性氧的重要种类之一，它能透过细胞膜形成活性的氧自由基，引起氧化损伤。ROS过量产生会使细胞结构受到破坏，引发机体老年性痴呆、肿瘤及炎症等氧化损伤相关疾病。对组织器官氧化应激性损伤与保护的研究一直备受人们的关注。w-不饱和脂肪酸是指包含两个以上双键的不饱和脂肪酸，包括α-亚麻酸（ALA），二十碳五烯酸（EPA）和二十二碳六烯酸（DHA）等，是人体必需脂肪酸，具有抗氧化、抗炎和抗癌的生理功能。其中二十二碳六烯酸是大脑磷脂的重要组成成分，在人体的营养、发育和健康等方面起着重要作用。有研究发现，二十二碳六烯酸具有减轻氧化应激引起的肝脏损伤作用。但目前早期如何快速准确评价二十二碳六烯酸对于肝脏损伤的保护作用有待建立。

MicroRNA（miRNA）是在真核生物中发现的一类内源性的具有调控功能的非编码小RNA，其大小约18~24个核苷酸。miRNAs 通过与靶 mRNA 的 3'-UTR（3'-untranlatedregions，3'-UTR）碱基完全或不完全配对，调节靶mRNA的翻译或促进其降解调控生物体生理病理过程。最近有研究发现，miR-101-3p参与胃癌、卵巢癌、肝癌和乳腺癌等肿瘤的发展发生，但其是否可以作为二十二碳六烯酸降低肝脏损伤的早期分子诊断标志物尚未报道。

HepG2细胞中代谢酶保持相对的稳定，不会因为传代次数增多而表型和内部发生改变，所含有的生物转化代谢酶与人正常肝实质细胞同源。因此，HepG2常被用于体外肝细胞代谢和遗传实验研究的理想细胞系。细胞造模选用目前公认的过氧化氢诱导肝脏损伤的造模方式，建立稳定的细胞模型，为后续实验研究提供基础。

发明内容

本发明的目的在于针对上述问题，提供一种受二十二碳六烯酸调控的microRNA及其应用。本发明以microRNA miR-101-3p作为二十二碳六烯酸保护肝脏损伤的早期分子诊断标志物，拓展了microRNA miR-101-3p的应用方向，也为二十二碳六烯酸保护肝脏损伤的评价方法的建立提供依据。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明的目的之一在于：提供一种受二十二碳六烯酸调控的microRNA：所述microRNA为miR-101-3p，其核苷酸序列为5′-UACAGUACUGUGAUAACUGAA-3′。

本发明的另一目的在于：上述受二十二碳六烯酸调控的microRNA作为早期分子诊断标志物在二十二碳六烯酸保护肝脏损伤检测中的应用。

进一步的，上述应用，包括以下步骤：

（1）构建过氧化氢诱导肝损伤的细胞模型，以U6为内参，实时荧光定量PCR计算过氧化氢诱导肝损伤细胞模型中miR-101-3p/U6表达量的比值，记为A；