[发明专利]一种猪屎豆多倍体高效诱导方法

说明书

本发明提供了一种猪屎豆多倍体高效诱导方法，将暗培养获得的露白猪屎豆种子，浸泡于添加有二甲基亚砜助溶的秋水仙碱溶液中振荡培养，其中，秋水仙碱溶液中秋水仙碱的浓度为0～200mg/L且不为0，培养时间为12～48h；处理结束后，用蒸馏水冲洗3～5遍，播种于盆钵中；从得到的苗中挑选多倍体，即诱导得到多倍体猪屎豆。本发明采用萌发的猪屎豆种子作为多倍体诱导体，优化秋水仙碱浓度和诱导时间，实现了猪屎豆良好变异率和成苗率，多倍体诱导率最高可达到13.33％，提高了成苗质量，操作简单，成本低，稳定性高，便于推广应用，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于植物多倍体育苗技术领域，具体涉及一种猪屎豆多倍体高效诱导方法。

背景技术

猪屎豆(Crotalaria pallida)为豆科蝶形花亚科猪屎豆属植物，为一年生灌木状草本。广泛分布于非洲、美洲、大洋洲、亚洲热带及亚热带地区。猪屎豆属植物在我国南方地区具有广泛的适应性，秦岭以南的19个省区都有分布。猪屎豆具有药用价值和可供绿肥使用之外，具有生长快、产量高以及粗蛋白含量高等饲用功能特性。总之，猪屎豆是一种开发利用潜力巨大的农业资源植物。

猪屎豆为典型的蝶形花植物，二体雄蕊，且为自交亲和种，不存在无融合生殖现象，主要是通过主动自交产生种子进行繁殖。目前，猪屎豆新品种选育主要以系统种源选择为主，人工种间杂交存在受精障碍，得不到杂交种子，这在一定程度上限制了其新品种选育进程，上述问题，传统的杂交手段不能有效解决，开展其他育种技术研究有非常紧迫的现实意义。

多倍体植物常表现出叶片肥厚、花朵变大、抗性增强等特点。经济价值均得到普遍提高。利用染色体加倍，可以人工创造新的植物类型，用多倍体做亲本，有利于克服远缘杂交不亲和性。因此利用多倍体材料作亲本是克服猪屎豆种间远缘杂交障碍的关键技术，如何高效获得多倍体种质就尤为关键。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种猪屎豆多倍体高效诱导方法，操作简单，稳定性高，诱导率高，鉴定效率高，育种周期短。

本发明的第一个方面是提供一种猪屎豆多倍体高效诱导方法，包括以下步骤：

(1)种子萌发：将猪屎豆种子清洗消毒后，进行破皮处理，暗培养至种子露白；(2)多倍体诱导：将暗培养获得的露白种子，浸泡于添加有二甲基亚砜助溶的秋水仙碱溶液中振荡培养，处理结束后，用蒸馏水冲洗3～5遍，播种于盆钵中；(3)多倍体鉴定：从得到的苗中挑选多倍体，即诱导得到多倍体猪屎豆。

其中，步骤(2)中秋水仙碱溶液中秋水仙碱的浓度为0～200mg/L且不为0，例如10mg/L、20mg/L、30mg/L、40mg/L、50mg/L、60mg/L、70mg/L、80mg/L、100mg/L、120mg/L、150mg/L、180mg/L、200mg/L等。

其中，步骤(2)中培养时间为12～48h，例如12h、14h、16h、20h、22h、24h、26h、28h、30h、32h、36h、38h、40h、44h、48h等。

优选地，步骤(2)中，秋水仙碱溶液中秋水仙碱的浓度为50～200mg/L，培养时间为12h；或者秋水仙碱溶液中秋水仙碱的浓度为50mg/L，培养时间为12～48h。

更优选地，步骤(2)中，秋水仙碱溶液中秋水仙碱的浓度为100～200mg/L，培养时间为12h，或者秋水仙碱溶液中秋水仙碱的浓度为50mg/L，培养时间为24h，

进一步优选地，步骤(2)中，秋水仙碱溶液中秋水仙碱的浓度为100mg/L，培养时间为12h。