[发明专利]UBE2S调控PTEN-AKT信号轴促进HCC化疗耐药原因的验证方法

说明书

本发明提供一种UBE2S调控PTEN‑AKT信号轴促进HCC化疗耐药原因的验证方法，包括如下过程：验证HCC中UBE2S与耐药通路关系，在HCC细胞中沉默UBE2S，利用RNA‑seq技术和基因富集分析证实UBE2S与耐药通路；验证HCC细胞中UBE2S表达对氟尿嘧啶和奥沙利铂的耐药性；验证转录因子FOXM1与UBE2S表达的相关性；验证FOXM1‑UBE2S下游分子及其调控作用，体内实验和体外实验。本发明验证了在化疗耐药的HCC细胞中存在UBE2S的异常高表达，通过促进PTEN泛素化，降低PTEN蛋白表达水平，调控PI3K‑AKT信号轴影响化疗耐药。实UBE2S作为HCC化疗疗效预测指标、逆转耐药新靶点的潜力，有利于相关研究人员通过克服HCC化疗耐药提高疗效，改善患者的预后。

技术领域

本发明涉及HCC治疗领域，具体为UBE2S调控PTEN-AKT信号轴促进 HCC化疗耐药原因的验证方法。

背景技术

肝细胞肝癌(HCC)是原发性肝癌中最常见的病理类型，具有起病隐匿且 侵袭性高的特点，多数患者在确诊时疾病已达到晚期。目前HCC的总体治疗效 果不理想，即使在接受根治性手术的患者中，5年复发率仍高达70％，5年的总 生存率低于20％，系统性治疗是晚期及复发性HCC患者的主要治疗方法，近年 来，虽然免疫治疗在肝癌中取得较大突破，但免疫治疗单药有效率低。

在多个瘤种中显示，免疫治疗与化疗联合能够显著提高有效率，避免快速 进展，是扩大获益人群的重要方向，其中奥沙利铂联合氟尿嘧啶方案 (FOLFOX4)显示出较好的疗效，是指南推荐最常用的化疗方案之一，该方案 耐受性较好，治疗窗宽，与其他药物相比更具有药物经济学效应。

但肝癌的化疗耐药性是导致治疗失败的主要原因，甚至加速疾病进展，成 为肝癌系统性治疗的瓶颈。因此，探索肝癌化疗耐药的机制、寻找克服耐药的 方法，对于提高化疗疗效、改善患者生存至关重要。但目前UBE2S与肝癌化疗 耐药相关的研究较少，因此，我们拟探索UBE2S在肝癌化疗耐药中的相关作用 机制，并进行验证，以便于相关研究人员寻找逆转HCC化疗耐药的方法。

发明内容

本发明目的在于提供UBE2S调控PTEN-AKT信号轴促进HCC化疗耐药 原因的验证方法，以验证UBE2S在肝癌化疗耐药中的相关作用机制。

为达成上述目的，本发明提出如下技术方案：UBE2S调控PTEN-AKT信号 轴促进HCC化疗耐药原因的验证方法，包括如下过程：

S1:验证HCC中UBE2S与耐药通路关系，在HCC细胞中沉默UBE2S，利 用RNA-seq技术和基因富集分析证实UBE2S与耐药通路；

S2:验证HCC细胞中UBE2S表达对氟尿嘧啶和奥沙利铂的耐药性；

S3:验证转录因子FOXM1与UBE2S表达的相关性；

S4:验证FOXM1-UBE2S下游分子及其调控作用；

S5:体内实验，构建裸鼠肝细胞癌原位移植瘤模型，验证 FOXM1-UBE2S-PTEN-AKT(p-AKT)通路在体内的作用；体外实验，选取接受氟 尿嘧啶及奥沙利铂治疗的HCC患者的癌组织及癌旁组织，检测癌组织和癌旁组 织中PTEN和UBE2S表达水平，并分析其与患者的临床病理特征及化疗药物敏 感性的相关性。

进一步的，在本发明中，S1具体过程如下：

细胞株和细胞培养：HCC细胞株(Hep3B,MHCC-97L,HepG2,Huh7和 PLC/PRF/5)；DMEM培养基(DMEM,Gibco,USA)加入10％胎牛血清(FBS, Hyclone,USA)和1％青霉素链霉素混合物(Invitrogen,USA)置于含有5％二氧 化碳的37℃恒温箱内；