[发明专利]miR-663a或其靶基因CKDN2A在薄型子宫内膜中的应用

说明书

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及miR‑663a或其靶基因CKDN2A在薄型子宫内膜中的应用。本发明公开了检测miR‑663a或其靶基因CKDN2A表达水平的试剂在制备检测薄型子宫内膜的产品中的应用。进一步，本发明还公开了一种缓解或修复缺氧损伤EEC的生物制剂及其应用。本发明通过转录组测序技术筛选出miR‑663，细胞功能实验和Western blot实验显示，miR‑663可显著抑制EEC缺氧损伤发生，并且这种抑制能够通过靶基因CDKN2A实现，为薄型子宫内膜的治疗提供了新的思路。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及miR-663a或其靶基因CKDN2A在薄型子宫内膜中的应用。

背景技术

薄型子宫内膜指排卵前子宫内膜厚度≤7mm，病理特征显示为腺上皮生长缓慢，子宫动脉血流阻力高，血管生成不良和血管内皮生长因子低表达。研究显示，薄型子宫内膜在种植窗期(月经第20-24d)容受性下降，血管内皮细胞生长因子VEGF及整合素β3表达严重缺乏，影响胚胎植入和着床，是导致临床不孕不育的高发因素。临床上因薄型子宫内膜导致不孕症的发生率越来越高，有部分患者因内膜因素无法受孕，辅助生殖技术给不孕不育患者带来了希望，但仍无法解决薄型子宫内膜的问题，由于内膜问题导致的低妊娠率尤为突出。在胚胎质量既定的情况下，子宫内膜作为胚胎着床和发育的“土壤”，在妊娠中起着举足轻重的作用，因此改善子宫内膜容受性是治疗不孕的关键。子宫内膜损伤病因，目前研究认为是多因素诱发引起的女性子宫内膜损伤，包括感染(结核杆菌感染)、激素分泌失调、子宫内膜及卵巢血流动力学改变、刮宫术、医源性损伤及炎症因子刺激等引起的，包括薄型子宫内膜、子宫内膜异位、子宫内膜粘连、薄型子宫内膜伴宫腔粘连等病症。

在导致薄型子宫内膜发生的众多因素中，内膜内血管缺血或血流减慢导致子宫内膜细胞缺氧这一治病因素引起科研人员的广泛关注。但是，目前对于薄型子宫内膜的分子机理研究尚浅。已有研究证实薄型子宫内膜中VEGF、LIF和整合素β3等与细胞生长和血管生成相关的因子表达显著降低；使用干细胞外泌体治疗后，VEGF、LIF和整合素β3等分子的表达明显上升，与正常组织水平相当，但其内在分子机制尚不清晰。因此，需要进一步的深入探究干细胞外泌体修复薄型子宫内膜的潜在分子机理。

而干细胞分泌的外泌体内含有大量miRNA，对多种疾病具有治疗作用，因此本发明深入探究了外泌体miRNA对薄型子宫内膜的修复作用及其潜在的分子机制。

发明内容

为了寻找与薄型子宫内膜发生、发展有关的miRNA，本发明一个目的在于提供miR-663a及其靶基因CKDN2A在制备诊断、预防和/或治疗薄型子宫内膜产品中的应用。

为实现上述目的，本发明具体技术方案如下：

本发明第一方面提供了检测miR-663a或其靶基因CKDN2A表达水平的试剂在制备检测薄型子宫内膜的产品中的应用。

所述miR-663a选自以下组中的至少一种：miR-663a初始miRNA、miR-663a前体miRNA、成熟miR-663a；所述miR-663a初始miRNA能在人细胞内被剪切并表达成成熟miR-663a；所述miR-663a前体miRNA能在人细胞内被剪切并表达成成熟miR-663a。

虽然在某些具体实施方式中所使用的是成熟miR-663a，但是本领域技术人员可以预期，初始miRNA(pi-miR-663a)、前体miRNA(pre-miR-663a)将可以获得与成熟miR-663a同样的技术效果，因为细胞有能力进一步将初始miRNA(pi-miR-663a)、前体miRNA(pre-miR-663a)加工为成熟miR-663a。

优选地，所述miR-663a在缺氧损伤EEC中下调；所述CKDN2A在缺氧损伤EEC中上调。

优选地，所述检测miR-663a表达水平的试剂包括检测miR-663a的特异性引物；所述检测CKDN2A表达水平的试剂包括检测CKDN2A的特异性引物或抗体。