[发明专利]一种退化沙荒化土壤丛枝菌根真菌菌剂的扩繁方法

说明书

本发明公开了一种退化沙荒化土壤丛枝菌根真菌菌剂的扩繁方法，涉及微生物菌剂的生产技术领域；包括以下步骤：配制培养基质：基质原料经灭菌处理后混匀，配制成培养基质；(2)宿主植物催芽：高丹草种子经过催芽处理，得到催芽后的高丹草种子；(3)接种扩繁：在所述培养基质中接种丛枝菌根真菌，之后播种所述催芽后的高丹草种子，待高丹草生长至收获期，去除地上部分，剩余根系和基质部分风干，粉碎混匀，得到所述退化沙荒化土壤丛枝菌根真菌菌剂。本发明利用高丹草作为宿主植物，可以短期内获得大量丛枝菌根；针对退化沙荒地建立专门的丛枝菌根真菌菌剂扩繁方法和技术，为退化沙荒地的生态修复提供技术指导和奠定应用基础。

技术领域

本发明涉及微生物菌剂的生产技术领域，特别是涉及一种退化沙荒化土壤丛枝菌根真菌菌剂的扩繁方法。

背景技术

菌根是真菌与植物根系形成的互惠共生体，是自然界中一种普遍的植物共生现象。菌根真菌的分布是全球性的，从地球的北极到南极到处都有菌根真菌的分布。涉及农田作物、野生植物、极地高山植物、热带植物、盐生植物等。丛枝菌根真菌(Arbuscularmycorrhizal fungi,AMF)是一种内生的菌根真菌，也是现存最古老的无性真菌生物之一。丛枝菌根真菌存在于生态系统的多种生境中，许多研究表明丛枝菌根真菌对植物养分的吸收利用(尤其是磷元素)、抗旱、抗寒、耐盐碱以及重金属毒害等方面有着显著的积极作用。在大力促进生态环境绿色可持续发展的时代背景下，丛枝菌根真菌作为一种有效的微生物资源，在提高作物对自然资源的利用率，减少农业生产造成的环境污染等方面有着广阔的应用前景。AMF是一种严格的共生微生物，无法离体培养。目前，真菌扩繁的方法有很多，多采用沙土等混合基质栽培三叶草等植物，利用植物与菌根的共生进行扩繁，具体培养方法有以下几类：

1、盆钵培养法

盆钵培养法是丛枝菌根真菌扩繁的主要方式，即AMF的繁殖体(孢子、菌丝、泡囊、菌根根段或侵染土壤)接种于活体植物生长的盆钵基质中，最终获得AMF繁殖体的混合菌剂。该方法的优点在于操作简单、方法可靠，但由于沙土营养条件较差，透气不保水，开放式管理，导致培养周期较长、繁殖体产量少、易污染。

2、静止营养液培养法

利用白三叶草在灭菌的营养液中培养，将三叶草种子和AMF孢子与沙基质放在有筛网的穴盘上培养，菌丝体和根系穿过网筛在营养液中生长，获得的菌根和营养液均可作为接种剂。该方法获得的的接种物质量较高，多用于科研或生产上小面积应用所需的接种物的生产，但需要特殊的装置，成本较高，局限性大。

3、流动营养液培养法

利用玉米或菜豆等作为宿主植物，固定于流动液培养槽中，槽中营养液淹没根系，以8～10L/min的流速循环流动，定期检测循环液养分含量，获得菌根接种剂。该方法避免了其它微生物的污染，但根系长期浸泡在液体中，对菌剂繁殖速度和质量有一定影响，需要较高的技术条件和技术人员。

4、雾化培养法

利用特制的气雾培养箱将预接种的宿主植物架在空中，然后在其根系周围设置喷雾器，每隔数秒对植物根系喷射雾化的营养液，满足植物对水分和营养的需求，可在无土条件下大量生产AMF。该方法的优点是生产的菌剂纯度高、质量轻，但雾化培养成本高、对营养液要求的参数较多，尤其是对磷和PH值得控制十分严格，技术难度较大。

5、玻璃珠分室培养法

玻璃珠分室培养法是利用不同孔径的尼龙网将有机玻璃盒隔成5室或3室，将孢子和种子置于植物生长室，植物根系可以透过筛网到达菌根室，只有菌丝可以穿过孔径更小的尼龙网达到真菌室。植物室填充的介质是土壤，菌根室填充的是河沙，真菌室填充的是约3mm左右的玻璃珠。该方法的优点是真菌和基质易于分离，获得大量、纯净的菌剂，但技术难度较大，仅用于科研工作中的小规模接种繁殖，无法大规模生产。