[发明专利]一种金刚烷胺免疫磁珠及其制备方法与应用

说明书

本发明属于食品安全检测技术领域，具体涉及一种金刚烷胺免疫磁珠及其制备方法与应用。本发明的免疫磁珠能特异性富集金刚烷胺，在短时间内迅速、有选择地将样品中的金刚烷胺富集与纯化；并且可以避免有机溶剂的大量使用，绿色环保；还能有效地减少样品中其他杂质的干扰，提高了检测的准确性和精准性；与胶体金结合检测金刚烷胺的过程中，检测的灵敏度高，精密性好，大大降低了最低检测限，且操作简便，成本低，可广泛应用于饲料、肉制品、动物组织中金刚烷胺的纯化、富集与分离，符合市场需求，对食品中金刚烷胺的安全检测和初筛具有重要的意义。

技术领域

本发明属于食品安全技术领域。更具体地，涉及一种金刚烷胺免疫磁珠及其制备方法与应用。

背景技术

金刚烷胺(Amantadine，AMA)药物作为一种抗病毒药物，曾大量用于预防和治疗猪传染性胃肠炎和禽流感，是疾病治疗的常用药。在养殖过程中出现乱用、滥用、长期或超量使用的现象，会导致金刚烷胺药物在动物体内残留，最终进入人体，长期积累会出现耐药性、神经过敏等一系列副作用。因此，我国农业部在2005年发布的第560号公告明确规定，在兽医药品中禁止使用金刚烷胺等抗病毒药物。

目前，检测金刚烷胺的方法主要有仪器分析法和免疫分析法。鸡肉、鸭肉和饲料最常用的国标检测方法有高效液相色谱法、超高效液相色谱-串联质谱法(最低检测灵敏度为1ug/kg)。仪器分析方法虽然准确度高，但操作复杂、耗时长，费用高，难以满足对于大批量快速检测的要求。免疫分析法可以解决上述问题，但免疫分析法的灵敏度低、精密度差，往往都需要净化样品，如用液液萃取、固相萃取等方法净化，需要消耗大量有机溶剂。如中国专利申请公开了一种利用时间分辨荧光免疫分析技术对金刚烷胺进行检测，虽然其能检测金刚烷胺，但其精密度差、无法准确定量、操作复杂、成本较高，无法满足对金刚烷胺样品残留快速定量检测的需求。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有缺乏富集金刚烷胺免疫磁珠缺陷和不足，提供一种金刚烷胺免疫磁珠，该磁珠可有效富集净化金刚烷胺，并能联合胶体金对金刚烷胺样品的残留进行快速定量检测，能大大降低金刚烷胺的检测限，且检测过程中操作简单、可以大大缩短前处理时间，成本低。

本发明的目的为提供一种金刚烷胺免疫磁珠的制备方法。

本发明的另一目的为提供一种金刚烷胺的检测方法。

本发明的另一目的为金刚烷胺免疫磁珠在检测金刚烷胺中的应用。

本发明的上述目通过以下技术方案实现：

一种金刚烷胺免疫磁珠，包括羧基化纳米磁珠、金刚烷胺多克隆抗体，所述金刚烷胺多克隆抗体包裹在羧基化纳米磁珠表面。

优选地，所述羧基化纳米磁珠包括羧基化四氧化三铁纳米磁珠、羧基化聚苯乙烯磁性微球。

优选地，所述羧基化纳米磁珠与金刚烷胺多克隆抗体的质量比为：(5～20)mg:(20～60)ug。

本发明进一步保护一种金刚烷胺免疫磁珠的制备方法，包括以下步骤：

将羧基化纳米磁珠洗涤后加入活化剂溶液，与金刚烷胺多克隆抗体混匀，于室温孵育，洗涤，加入封闭液于室温孵育，即得；

所述孵育的体系pH为5.5～7.4。

优选地，所述活化剂溶液用PH＝5.5～7.4的MES溶液配置。

优选地，金刚烷胺免疫磁珠的制备方法在加入封闭液于室温孵育还包括用含0.02％NaN₃和0.5％BSA的PBS缓冲液重悬，于4℃保存；

优选地，所述洗涤用缓冲液洗涤。

更优选地，所述缓冲液为PBS缓冲液、MES缓冲液或磷酸盐吐温缓冲液(PBST，含有0.05％吐温-20)。