[发明专利]一种人体尿液中新烟碱类杀虫剂的检测方法

说明书

本发明提供一种人体尿液中新烟碱类杀虫剂的检测方法，所述检测方法步骤如下：预处理尿液样品（包括酶解、固相萃取）；对处理后的尿液样品进行液相色谱串联质谱分析。以内标法建立标准曲线，计算样本平均回收率和相对标准偏差，并与标准参考物质比较。本发明能更加全面地反映其真实水平；其次快速，样品检测时间仅需5min，可以大大减少时间成本；再次准确稳定，样品平均回收率范围为88.4‑118.6%，日内和日间相对标准偏差均在20%以内；然后线性良好，9种NNIs标准品的回归方程中R2均大于0.99；最后是灵敏度高，方法的最低检出限和定量限降低了几十倍，几乎可得到100%识别率。

技术领域

本发明属于生物样本快速检测技术，尤其是涉及尿液中新烟碱类杀虫剂检测方法。

背景技术

新烟碱类杀虫剂（neonicotinoid insecticides, NNIs）是基于烟碱结构开发出来的一类新型杀虫剂，具有广谱高效、低挥发性、高渗透性和低残留等优点，被大规模应用于农业、园林业以及畜牧业的害虫防治。然而，该类杀虫剂在环境残留率大，且可通过“水-土壤-植物”系统污染食物链，最终进入生物体内，并对人体健康构成潜在威胁。

研究显示NNIs暴露可能会引起新生儿法洛氏四联症、幼童自闭症、成人肺功能异常以及其他人体疾病。NNIs在人体内代谢较快，主要经尿液排出体外，但目前有关人体尿液中的NNIs暴露水平的报道较少，且相关研究大多集中于原物，忽略该类化学物在体内的代谢物形式，因此无法准确评价人群中NNIs的真实水平。

同时发现尿中NNIs检测普遍存在检测耗时长、检出限偏高以及某些检测物质回收率不理想等问题。鉴于NNIs可长期低剂量暴露于人体、并产生多种不良健康效应，急需建立人尿中该类杀虫剂暴露水平的检测方法，以用于评估人群暴露水平，并为后续探索NNIs暴露对人体健康不良效应研究提供必要基础。

发明内容

为解决上述尿中NNIs检测普遍存在检测耗时长、检出限偏高以及某些检测物质回收率不理想的技术问题，本发明提供了一种人体尿液中新烟碱类杀虫剂的检测方法，具体方法如下：

一种人体尿液中新烟碱类杀虫剂的检测方法，所述检测方法步骤如下：

尿液室温解冻后，避光酶解；

进行固相萃取，净化萃取尿液样本中的目标物质，以甲醇溶液和超纯水对萃取柱进行活化后添加尿液进行润洗，萃取后经淋洗，采用甲醇溶液进行洗脱，将获得的洗脱液离心浓缩至干，用乙腈水溶液进行复溶；

对处理后的尿液样品进行液相色谱串联质谱分析，以内标法建立标准曲线，计算样本平均回收率和相对标准偏差，并与标准参考物质比较；

其中，所述目标物质包括IMI、ACE、CLO、THM、THD、DIN、NIT、6-C1NA、N-DMA；

所述液相色谱串联质谱分析的条件为：

使用1290 Infinity高效液相色谱仪，色谱柱温度保持在40°C，进样量为10μL，流速恒定为0.3mL/min，运行时间5min；流动相组成为A相0.1％甲酸水溶液和B相乙腈溶液；

洗脱方式：梯度洗脱；

所述梯度洗脱为：

流动相A为70%、流动相B为30％初始浓度；

在2.5分钟内流动相B增加到50％，对应的流动相A降为50%；

在0.5分钟内流动相B上升到90％并保持0.5分钟，对应的流动相A降为10%；

在0.5分钟内流动相B返回到30％并保持1分钟，对应的流动相A返回70%，直至平衡下一个样品，所有分析物在5分钟内完成分析；

质谱条件为

离子源：ESI；

源温度：500至600℃；

离子喷雾电压为4000至5500 V；

气帘气为10-40 Psi；

雾化气为50-60 Psi；

辅助气为50-60 Psi；