[发明专利]人类静脉血栓风险基因多态性检测试剂盒及工艺和应用在审
| 申请号： | 202210226445.6 | 申请日： | 2022-03-10 |
| 公开（公告）号： | CN114672548A | 公开（公告）日： | 2022-06-28 |
| 发明（设计）人： | 伦立民;韩鑫涛 | 申请（专利权）人： | 华捷生物科技（青岛）有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6883 | 分类号： | C12Q1/6883;C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京智行阳光知识产权代理事务所(普通合伙) 11738 | 代理人： | 刘陈发 |
| 地址： | 266000 山东省青岛市高*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 人类 静脉 血栓 风险 基因 多态性 检测 试剂盒 工艺 应用 | ||
1.人类静脉血栓风险基因多态性检测试剂盒，其特征在于：包括同时检测PAI-1 4G/5G、THBD c.-151GT和PROC 565CT(rs146922325)和PROC c.574_576del基因多态性的试剂盒，所述试剂盒包括试剂A、试剂B、阳性质控A、阳性质控品B和阴性对照；
所述试剂A包括PAI-1 4G/5G野生型和THBD c.-151GT野生型的特异性引物及普通探针和配对引物，PROC 565CT上下游引物、PROC 565CT野生型和突变型特异性探针，TaqDNA聚合酶、10xbuffer，dNTP和BSA；
所述试剂B包括PAI-1 4G/5G突变型和THBD c.-151GT突变型的特异性引物及普通探针和配对引物，PROC c.574_576del上下游引物、PROC c.574_576del野生型和突变型特异性探针，Taq DNA聚合酶、10xbuffer，dNTP和BSA；
所述阳性质控A包括PAI-1 4G/5G野生型质粒1条，THBD c.-151GT野生型质粒1条，PROC 565CT等位基因野生型和突变型质粒各1条制备成混合液；
所述阳性质控品B包括PAI-1 4G/5G突变型质粒1条，THBD c.-151GT突变型质粒1条，PROC c.574_576del等位基因野生型和突变型质粒各1条制备成混合液；
所述阴性对照为无菌去离子水。
2.根据权利要求1所述的人类静脉血栓风险基因多态性检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中PCR混合液引物的浓度为0.20μM；探针的浓度为0.1μM，引物探针、Taq DNA聚合酶、dNTP、10x buffer、BSA配制成20ul/反应，5ul模板/反应，共25ul反应体系。
3.根据权利要求1所述的人类静脉血栓风险基因多态性检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒采用多重PCR-荧光探针法，在完全封闭的反应体系中进行核酸扩增与检测，PCR扩增反应体系为0.25ul的Taq DNA聚合酶、2.5ul的10x buffer、0.5ul的dNTP、0.3ul的BSA、5ul模板DNA，并用无菌去离子水补至25ul总体积，扩增程序为：95℃，2分钟，1个循环，95℃，10s，60℃，30s采集荧光，45个循环。
4.根据权利要求1所述的人类静脉血栓风险基因多态性检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒可以检测的样品为人全血或外周血样本。
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