[发明专利]一种产生2’-岩藻糖基乳糖的枯草芽孢杆菌及其应用

权利要求书

1.一种产生2’-岩藻糖基乳糖的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述重组枯草芽孢杆菌是以枯草芽孢杆菌为出发菌株，将甘露糖-6-磷酸异构酶基因manA、磷酸甘露糖变位酶基因manB、甘露糖-1-磷酸鸟苷转移酶基因manC、GDP-甘露糖脱水酶基因gmd、GDP-岩藻糖合酶基因wcaG和α-1,2-岩藻糖基转移酶基因futC整合枯草芽孢杆菌基因组上，并敲除β-半乳糖苷酶基因yesZ和ganA得到。

2.根据权利要求1所述的产生2’-岩藻糖基乳糖的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述甘露糖-6-磷酸异构酶基因manA的DNA序列和氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ IDNO.2所示；所述磷酸甘露糖变位酶基因manB的DNA序列和氨基酸序列分别如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示；所述甘露糖-1-磷酸鸟苷转移酶基因manC的DNA序列和氨基酸序列分别如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示、所述GDP-甘露糖脱水酶基因gmd的DNA序列和氨基酸序列分别如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示、所述GDP-岩藻糖合酶基因wcaG的DNA序列和氨基酸序列分别如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示；所述α-1,2-岩藻糖基转移酶基因futC的DNA序列和氨基酸序列分别如SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12所示；所述β-半乳糖苷酶基因yesZ的原始DNA序列和氨基酸序列分别如SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14所示；β-半乳糖苷酶基因ganA的原始DNA序列和氨基酸序列分别如SEQ ID NO.15和SEQ ID NO.16所示。

3.根据权利要求1所述的产生2’-岩藻糖基乳糖的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌选自枯草芽孢杆菌168、枯草芽孢杆菌ATCC6051、枯草芽孢杆菌WB600或枯草芽孢杆菌WB800。

4.根据权利要求1所述的产生2’-岩藻糖基乳糖的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述甘露糖-6-磷酸异构酶基因manA、磷酸甘露糖变位酶基因manB、甘露糖-1-磷酸鸟苷转移酶基因manC、GDP-甘露糖脱水酶基因gmd、GDP-岩藻糖合酶基因wcaG和α-1,2-岩藻糖基转移酶基因futC通过组成型启动子控制表达。

5.根据权利要求4所述的产生2’-岩藻糖基乳糖的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述组成型启动子选自启动子P43、P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8或P9；所述启动子P43、P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9的序列分别如SEQ ID NO.17-SEQ ID NO.26所示。

6.构建权利要求1-5中任一项所述的重组枯草芽孢杆菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：分别将甘露糖-6-磷酸异构酶基因manA、磷酸甘露糖变位酶基因manB、甘露糖-1-磷酸鸟苷转移酶基因manC、GDP-甘露糖脱水酶基因gmd、GDP-岩藻糖合酶基因wcaG和α-1,2-岩藻糖基转移酶基因futC的表达框，及β-半乳糖苷酶基因yesZ和ganA的敲除框，及基因同源片段连接至基因编辑载体上；

S2：依次将S1中所得基因编辑载体转化至枯草芽孢杆菌中，得到所述重组枯草芽孢杆菌。

7.根据权利要求1-5中任一项所述的重组枯草芽孢杆菌在发酵合成2’-岩藻糖基乳糖中的应用。

8.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述发酵合成2’-岩藻糖基乳糖的方法：将所述重组枯草芽孢杆菌活化后接种至种子培养基中，然后将所得种子液接种至发酵培养基中，发酵得到所述2’-岩藻糖基乳糖。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，种子液的接种量为5％-20％(V/V)。

10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的种子液的发酵条件：温度30-40℃，搅拌速度150-300rpm，时间8-12h。