[发明专利]一株产碱性磷酸酶的解淀粉芽孢杆菌及其应用

说明书

本发明公开一株产碱性磷酸酶的解淀粉芽孢杆菌及其应用，属于微生物的技术领域。本发明的目的是为了获得产率高和酶活高的碱性磷酸酶。本发明提供一种解淀粉芽孢杆菌和利用解淀粉芽孢杆菌制备酶活高和产量高的碱性磷酸酶。从土壤中分离纯化得到了产碱性磷酸酶的菌株，通过平板划线、种子培养、发酵培养后进行离心收集，能得到高纯度的解淀粉芽孢杆菌，解决了研究和生产中的难题，省却了酶的分离纯化步骤，该酶稳定性好，产物特异性高，具有潜在的工业应用价值。

技术领域

本发明属于微生物领域，具体涉及一株产碱性磷酸酶的解淀粉芽孢杆菌及其应用。

背景技术

碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)是一种底物专一性较低的磷酸单酯酶，在分子生物学中，是遗传常用的工具酶。产碱性磷酸酶的生物主要有动物、植物和微生物，商用碱性磷酸酶主要产自动物体(牛肠碱性磷酸酶)或植物体(麦芽)，产率低，价格昂贵，热稳定性较差，使来自于动植物碱性磷酸酶的使用受到了限制。

发明内容

本发明的目的是为了获得产率高和酶活高的碱性磷酸酶。本发明提供了一种解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)，所述解淀粉芽孢杆菌的于2022年1月17日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏号为GDMCC NO：62218，命名为解淀粉芽孢杆菌S-52。

本发明提供了含有上述解淀粉芽孢杆菌的微生物制剂。

本发明提供了上述的解淀粉芽孢杆菌或上述的微生物制剂在制备碱性磷酸酶中的应用。

本发明提供了一种制备碱性磷酸酶的方法，将上述的解淀粉芽孢杆菌在37℃的条件下，至少发酵96小时。

进一步地限定，其特征在于，用于发酵的培养基的碳源为玉米淀粉。

进一步地限定，用于发酵的培养基的氮源为酵母提取物。

进一步地限定，用于发酵的培养基含有玉米淀粉、酵母提取物和Mg²⁺。

进一步地限定，Mg²⁺为硫酸镁。

进一步地限定，用于发酵的培养基含有玉米淀粉17.48g/L、酵母提取物18.052g/L和 Mg2+0.744g/L。

进一步地限定，解淀粉芽孢杆菌发酵的接种量为5.59％。

本发明提供上述的制备碱性磷酸酶的方法在提高碱性磷酸酶酶活方面的应用。

本发明提供上述的制备碱性磷酸酶的方法获得的碱性磷酸酶。

有益效果：本发明提供一株高产碱性磷酸酶阳性突变体菌株S-52，利用碱性磷酸酶分析方法分析其碱性磷酸酶的活性为5277.95U/L。

【生物材料保藏】

一种解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)，于2022年1月17日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏号为GDMCC NO：62218，命名为解淀粉芽孢杆菌S-52，保藏地址为：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，广东省科学院微生物研究所。

附图说明

图1为基于16S rRNA基因的S-1菌株与近缘种的系统发育树；

图2为碳源对S-52碱性磷酸酶活性的影响；

图3为氮源对S-52碱性磷酸酶产酶活性的影响；

图4为金属离子对S-52碱性磷酸酶活性的影响；

图5为预测值与实际值的碱性磷酸酶生产的结果；