[发明专利]高活性植物凝集素的分离纯化工艺

权利要求书

1.一种利于得到高活性植物凝集素的分离纯化工艺，包括如下步骤：

步骤1：前处理：

将芸豆使用纯水充分浸泡后，脱皮后与pH为4.5～7.4的NaAc-HAc缓冲液混合，所述芸豆与NaAc-HAc缓冲液混合比为1g：(3～10)mL，破壁处理，得到浆液；

将浆液充分搅拌，使PHA充分溶出，经充分搅拌得到的所述浆液先经至少12h冷冻后，解冻复融；

调节浆液的pH为4.5～5.5，固液分离，取上清，得到PHA粗提液；或固液分离，调节浆液的pH为4.5～5.5后去除沉淀，取上清，得到PHA粗提液；

步骤2：SP离子交换色谱纯化：

将PHA粗提液上样在SP离子交换色谱柱，使用NaCl的缓冲液溶液梯度洗脱，所述缓冲液为20mM 的NaAc-HAc缓冲液，pH=5.0，洗脱时，NaCl的浓度依次为50mM、150mM两个梯度，每个梯度3～5个柱体积，收集150mM NaCl的PHA洗脱液，收集得到PHA洗脱液；

步骤3：换液：

将PHA洗脱液的缓冲体系切换为Tris缓冲液体系；

步骤4：DEAE离子交换色谱纯化：

使用DEAE离子交换色谱对换液后的PHA洗脱液进行洗脱纯化，所述洗脱液为NaCl的缓冲液溶液，所述缓冲液为20mM的 Tris缓冲液，pH=8.0，所述洗脱液中NaCl的浓度为70mM，3～5个柱体积，得到PHA-L蛋白溶液。

2.根据权利要求1所述的分离纯化工艺，其特征在于：步骤1中使用的所述缓冲液的浓度不超过50 mM。

3.根据权利要求1所述的分离纯化工艺，其特征在于：所述芸豆为红芸豆。

4.根据权利要求1～3任一项所述的分离纯化工艺，其特征在于：在步骤1的前处理中，所述浆液搅拌的搅拌转速为300～400 rpm，所述浆液搅拌的搅拌时间不低于3h，所述浆液搅拌的搅拌温度为2～10℃。