[发明专利]卵巢癌类器官模型的构建方法及其应用

权利要求书

1.一种卵巢癌类器官模型的构建方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)获取卵巢癌标本，将取部分癌灶标本置于组织保存液中浸泡，并置于冰上；其中，所述卵巢癌标本为卵巢癌癌灶或者皮下瘤的卵巢癌组织

2)将步骤1)上述部分癌灶标本用组织冲洗液冲洗后，选取活性较好，形态呈恶性程度高的癌组织，然后对癌组织剪碎、刮碎；得到匀浆状的组织碎片悬液；

3)将组织碎片悬液用组织冲洗液重悬后，过滤网，得到的卵巢癌类器官球体；

4)向卵巢癌类器官球体中加入裂红液，颠倒摇匀，室温放置后离心，弃上清，得到裂红后的卵巢癌类器官球体；

5)向裂红后的卵巢癌类器官球体中加入PBS重悬并离心，清洗一遍，得到大小适中且裂红后的卵巢癌类器官球体；

6)向步骤5)中得到的卵巢癌类器官球体中加入水凝胶，置于冰上，得到混合液，待用；

7)将步骤6)中的混合液种于细胞培养板或细胞培养皿内；

8)将接种了细胞球的培养板或接种了细胞球的培养皿置于细胞培养箱中培养，直至水凝胶凝固；最后取出细胞培养板于无菌细胞台中，在孔板中加入对应的类器官培养基培养，即得卵巢癌类器官模型，其中，卵巢癌类器官模型为卵巢癌PDO类器官模型或者卵巢癌PDXO类器官模型。

2.根据权利要求1所述卵巢癌类器官模型的构建方法，其特征在于：所述步骤1)中，组织保存液配方以高糖DMEM培养基为基础添加四季青，所述四季青的添加量为高糖DMEM培养基总体积的2-3％。

所述步骤2)中，组织冲洗液配方以高糖DMEM培养基为基础添加四季青和双抗，其中，所述四季青的添加量为高糖DMEM培养基总体积的2-3％；

所述双抗的添加量为高糖DMEM培养基总体积的0.1％，所述双抗由链霉素和青霉素组成且链霉素和青霉素重量比为1:3；

所述步骤8)中，类器官培养基其配方如下：1％的Glutanmax、1％的HEPES、0.1％的PS、20ng/ml的L-wnt3A、50ng/ml的R-spondin、100ng/ml的Noggin、50ng/ml的EGF、10ng/ml的FGF10、10ng/ml的FGF2、10ng/ml的50×B27、10mmol/ml的Nicotinamide、25mmol/ml的N-Acegglytene、1umol/ml的ProstaglandinE2、10umolg/ml的SB02190、500nmol/ml的A8301、10umol/ml的Y27632和0.1％的万古霉素。

3.根据权利要求1所述卵巢癌类器官模型的构建方法，其特征在于：所述步骤3)中，细胞球的直径为40～70μm。

4.根据权利要求1所述卵巢癌类器官模型的构建方法，其特征在于：所述步骤4)中，裂红液加入量为：每毫升的细胞球中5ml的裂红液；离心转速为1000转/分，时间为5～10min。

5.根据权利要求1所述卵巢癌类器官模型的构建方法，其特征在于：所述步骤8)中，细胞培养箱的温度为37℃，细胞时间为30min。

6.根据权利要求1所述卵巢癌类器官模型的构建方法，其特征在于：所述步骤8)中，所述卵巢癌类器官模型培养如：

在孔板中加入对应的类器官培养基，然后置于温度为37℃，5％二氧化碳细胞培养箱中，培养5-6天，每隔3天换液或者根据密度进行传代和保种，卵巢癌类器官模型。