[发明专利]一种鉴定川贝母的LAMP引物组、试剂盒及其检测方法与用途

权利要求书

1.一种鉴定川贝母的引物组，其特征在于：包括外引物F3、外引物B3、内引物FIP、内引物BIP；序列分别为

F3：5’-CGGATGACACCGTGTCGG-3’；

B3：5’-CGAGATATCCGTTGCCGAG-3’；

FIP：5’-CCGCAAATCGTGCCCGGAGCACTATGCCCGCCCTACC-3’；

BIP：5’-CGGCCTGCGCCAAGGAACAGGATAGAGAGCGAACGCCG-3’。

2.一种鉴定川贝母的试剂盒，其特征在于，含有如权利要求1所述的引物组。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，含有如权利要求1所述的引物组，通过25μL的LAMP反应体系检测，LAMP反应体系包括：

4.一种鉴定川贝母的LAMP检测方法，其特征在于，包括步骤：

A1、提取鉴别待鉴定样品DNA；

A2、设计扩增川贝母DNA的LAMP引物；

A3、基于A1获取的待鉴定样品DNA、A2获取的LAMP引物配置相应的LAMP反应体系；

A4、加入用于判断待鉴定样品DNA是否成功扩增的显色材料至LAMP反应体系中，通过反应体系显色状态以确认待鉴定样品DNA是否为川贝母。

5.根据权利要求4所述的一种鉴定川贝母的LAMP检测方法，其特征在于，步骤A2中的LAMP引物包括外引物F3、外引物B3、内引物FIP、内引物BIP；其序列为：

F3：5’-CGGATGACACCGTGTCGG-3’；

B3：5’-CGAGATATCCGTTGCCGAG-3’；

FIP：5’-CCGCAAATCGTGCCCGGAGCACTATGCCCGCCCTACC-3’；

BIP：5’-CGGCCTGCGCCAAGGAACAGGATAGAGAGCGAACGCCG-3’。

6.根据权利要求5所述的一种鉴定川贝母的LAMP检测方法，其特征在于，通过25μL的LAMP反应体系检测，LAMP反应体系包括：

7.根据权利要求4所述的一种鉴定川贝母的LAMP检测方法，其特征在于，步骤A4具体包括步骤：

A41、配置LAMP反应体系及显色材料于反应容器中；

A42、温度为63℃条件下水浴1h；

A43、依据反应体系显色状态判断LAMP扩增结果并鉴定。

8.一种鉴定川贝母的LAMP引物组的制备方法，其特征在于，包括步骤：

B1、根据川贝母序列设计待验证LAMP引物组；

B2、提取川贝母DNA及混伪品DNA；

B3、基于获取的待验证LAMP引物组、获取的川贝母DNA及混伪品DNA建立相应的川贝母LAMP反应体系、混伪品LAMP反应体系；

B4、加入用于判断川贝母DNA是否成功扩增的显色材料至各LAMP反应体系中，通过各反应体系显色状态以确定待验证LAMP引物组是否针对川贝母DNA特异性扩增；

若显色结果表明待验证LAMP引物组针对川贝母DNA特异性扩增，则确定该引物组为有效鉴定川贝母的LAMP引物组，即获得鉴定川贝母的LAMP引物组；

若显色结果表明待验证LAMP引物组非特异性扩增川贝母DNA，则依据川贝母和混伪品的ITS序列差异进行引物组序列的改进，改进后返回步骤B3继续验证，直至验证通过。

9.根据权利要求8所述的一种鉴定川贝母的LAMP引物的制备方法，其特征在于，步骤B4中引物组序列的改进包括：在FIP引物序列的3’端添加错位碱基。

10.权利要求1所述引物组或权利要求2～3任一项所述的试剂盒在制备鉴定川贝母的产品中的用途。