[发明专利]一种发根农杆菌介导的获得转基因除虫菊毛状根的方法

权利要求书

1.一种发根农杆菌介导的获得转基因除虫菊毛状根的方法，其特征是，步骤如下：

S1、从除虫菊无性系W99组培苗的叶柄处切下叶片，并用OD₆₀₀＝0.5的发根农杆菌MSU440菌液侵染所述叶片；

S2、将步骤S1所述的叶片滤出，并用滤纸吸干所述叶片表面的菌液，然后将所述叶片正面向上接种于MS基本培养基中，暗培养2天；

S3、将步骤S2所述的叶片转移至固体培养基Ⅰ中培养20天，诱导所述叶片形成叶片根；

S4、将所述叶片根的根尖切下，并将根尖并排水平放置在固体培养基Ⅱ上，然后将所述固体培养基Ⅱ直立放置，使根尖的尖端朝上放置，培养7天，获得毛状根；

S5、选取不具向地性的毛状根，将所述毛状根的根尖切下，然后并排水平放置在固体培养基Ⅲ上，培养20天，获得抗性根；

S6、选取能伸长的抗性根，将所述抗性根切成多段，并水平放置在固体培养基Ⅳ上，然后进行继代培养，即可获得转基因除虫菊毛状根。

2.根据权利要求1所述的一种发根农杆菌介导的获得转基因除虫菊毛状根的方法，其特征是：步骤S3中，所述固体培养基Ⅰ包括MS基本培养基和400mg/L头孢噻肟；步骤S4中，所述固体培养基Ⅱ包括MS基本培养基和400mg/L头孢噻肟。

3.根据权利要求1所述的一种发根农杆菌介导的获得转基因除虫菊毛状根的方法，其特征是：步骤S5中，所述固体培养基Ⅲ包括MS基本培养基、400mg/L头孢噻肟和10mg/L卡那霉素；步骤S6中，所述固体培养基Ⅳ包括MS基本培养基、400mg/L头孢噻肟和10mg/L卡那霉素。

4.根据权利要求1所述的一种发根农杆菌介导的获得转基因除虫菊毛状根的方法，其特征是：所述MS培养基、固体培养基Ⅰ、固体培养基Ⅱ、固体培养基Ⅲ和固体培养基Ⅳ均含有0.7％琼脂和3％蔗糖。

5.根据权利要求1所述的一种发根农杆菌介导的获得转基因除虫菊毛状根的方法，其特征是：所述MS培养基、固体培养基Ⅰ、固体培养基Ⅱ、固体培养基Ⅲ和固体培养基Ⅳ均置于温度为24-26℃的黑暗条件下培养。