[发明专利]一种利用天然蓝藻材料保藏芽孢杆菌菌种的方法

说明书

本发明提供一种利用天然蓝藻材料保藏芽孢杆菌菌种的方法，所述方法包括以下步骤：步骤1，将待保藏的芽孢杆菌单菌落培养后作为种子菌培养至对数期；步骤2，将步骤1得到的菌液离心后舍弃上清液，先洗涤菌体沉淀，之后用PBS溶液重悬菌体沉淀；步骤3，将灭菌后的发菜或地木耳浸泡在步骤2得到的混合液中，之后进行恒温干燥，最后在‑80℃～25℃下保藏，完成芽孢杆菌菌种的保藏。本发明以天然蓝藻材料(发菜、地木耳)为载体进行菌种保藏，菌种存活率高，操作简单易行，经济节约，安全性高。

技术领域

本发明属于菌种保藏技术领域，具体涉及一种利用天然蓝藻材料保藏芽孢杆菌菌种的方法。

背景技术

微生物菌种是国家的重要生物资源，也是生产、教学和科学研究的基本材料。为确保菌种的质量和活力，正确的菌种保藏方法在微生物学研究及实际应用中至关重要。

目前，芽孢杆菌菌种的保藏方法存在一些缺陷，如操作复杂、菌种容易发生污染和退化，保藏所使用的冷冻保护剂经济成本高且不安全。

发明内容

针对现有蜡样芽孢杆菌菌种保藏存在的问题，本发明提供一种利用天然蓝藻材料保藏芽孢杆菌菌种的方法，以天然蓝藻材料(发菜、地木耳)为载体进行菌种保藏，菌种存活率高，操作简单易行，经济节约，安全性高。

本发明是通过以下技术方案来实现：

一种利用天然蓝藻材料保藏芽孢杆菌菌种的方法，包括以下步骤：

步骤1，将待保藏的芽孢杆菌单菌落培养后作为种子菌培养至对数期；

步骤2，将步骤1得到的菌液离心后舍弃上清液，先洗涤菌体沉淀，之后用PBS溶液重悬菌体沉淀；

步骤3，将灭菌后的发菜或地木耳浸泡在步骤2得到的混合液中，之后进行恒温干燥，最后在-80℃～25℃下保藏，完成芽孢杆菌菌种的保藏。

优选的，步骤1将待保藏的芽孢杆菌先置于液体培养基中，之后在35～38℃和150～300rpm的条件下恒温震荡培养12～18h，作为种子菌。

进一步，步骤1将所得的种子菌按1％的接种量接种到液体培养基中，培养至OD₆₀₀＝0.2～0.8。

优选的，步骤2将步骤1得到的菌液在5000～7000rpm下离心3～8min后舍弃上清液。

优选的，步骤2用浓度为0.01M、pH为7.0的PBS溶液洗涤菌体沉淀3～5次。

优选的，步骤2用与步骤1所述菌液等体积的PBS溶液重悬菌体沉淀，PBS溶液的浓度为0.01M、pH为7.0。

优选的，步骤3按如下过程对发菜或地木耳进行灭菌：

用质量分数为60％～80％的乙醇浸泡发菜或地木耳30～45s，之后用灭菌水进行漂洗，然后在紫外灯下照射0.5～1h，最后真空冷冻干燥，得到所述的发菜或地木耳。

优选的，步骤3中所述的发菜或地木耳与所述的混合液的比例为(0.01～0.1)g：1mL。

优选的，步骤3将灭菌后的发菜或地木耳在混合液中浸泡15～20min。

优选的，步骤3将浸泡后的发菜或地木耳在温度为20～30℃、相对湿度为40％～60％RH的恒温条件下干燥3～5天，再进行保藏。

与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：