[发明专利]一种噬菌体alpha3裂解蛋白E及其应用在审
| 申请号： | 202210251931.3 | 申请日： | 2022-03-15 |
| 公开（公告）号： | CN114736273A | 公开（公告）日： | 2022-07-12 |
| 发明（设计）人： | 马毅;刘绮颖;王菊芳 | 申请（专利权）人： | 华南理工大学 |
| 主分类号： | C07K14/005 | 分类号： | C07K14/005;C12N15/33;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 广州市华学知识产权代理有限公司 44245 | 代理人： | 宫爱鹏 |
| 地址： | 511458 广东省广州市*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 噬菌体 alpha3 裂解 蛋白 及其 应用 | ||
1.一种噬菌体alpha3裂解蛋白E，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID No:2所示。
2.编码权利要求1所述的噬菌体alpha3裂解蛋白E的基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID No：1所示。
3.权利要求1所述噬菌体alpha3裂解蛋白E在高效制备大肠杆菌菌影的应用。
4.根据权利要求3所述噬菌体alpha3裂解蛋白E的应用，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将所述噬菌体alpha3裂解蛋白E的基因与载体连接，构建重组表达质粒，转化大肠杆菌，获得重组大肠杆菌；
(2)将步骤(1)得到的重组大肠杆菌加到含卡那霉素的LB液体培养基中，振荡培养；转接到新鲜的LB培养基中振荡培养，当菌液OD600值达到1.0～2.2时，加入诱导剂IPTG诱导裂解蛋白的表达；最后收集诱导表达后的菌影。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，步骤(2)所述卡那霉素的浓度为50±10μg/mL；培养条件为37±5℃、220±50rpm。
6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，步骤(2)所述菌液OD600值为1.4～2.1，诱导裂解蛋白表达的时间为2～5h。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，步骤(2)所述菌液OD600值为1.87～2.01，诱导裂解蛋白表达的时间为3～5h。
8.根据权利要求4或5或6或7所述的应用，其特征在于，步骤(1)所述重组大肠杆菌的制备：构建含有噬菌体alpha3裂解蛋白E基因的重组质粒pET29a-E(α3)，将上述重组质粒转化至BL21(DE3)感受态细胞中，以卡那霉素为抗性筛选，得到重组大肠杆菌。
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