[发明专利]一种丹参素衍生的生物活性探针及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种可以在细胞水平上鉴定丹参素靶点蛋白的生物活性探针及其制备方法和应用，该探针以丹参素和丙炔胺为原料，通过将丹参素侧链上羧基与丙炔胺上的氨基发生缩合反应，合成炔基丹参素探针Tanp。通过双荧光基因报告系统分析显示该丹参素探针在抗炎活性上与丹参素原型并无显著性差异，因此该探针可以用于鉴定丹参素抗炎相关的靶点蛋白及相关的药效学评价。

技术领域

本发明属于化学生物学领域，尤其是涉及一种丹参素衍生的生物活性探针及其制备方法和应用。

背景技术

中药丹参为唇形科鼠尾草属植物丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)的干燥根和根茎，始载于《神农本草经》，列为上品。丹参味苦性微寒，入心、肝经，具有活血祛瘀、通经止痛、清心除烦等功效。丹参素既是丹参中含量较高的水溶性酚酸，又是丹参酚酸类化合物的水解产物，其水溶性好，性质较大分子的丹参酚酸更稳定。丹参素口服后，经胃肠道吸收入血，在体内主要以丹参素原型和II型代谢产物广泛分布在血清和除脑之外的其他组织中。丹参素在保护心脏、促进血管新生、改善认知障碍和抗肿瘤等方面均发挥了明显作用。

然而，丹参素发挥药效的靶点蛋白尚不明确，因此其药效机制无法阐明，这也阻碍了丹参药效的全面评价。目前对于丹参素活性机制研究主要集中在生物通路调节和活性指标评价方面，对于丹参素的靶点蛋白鉴定工作未见报道，这主要是由于缺乏有效的生物活性探针，这种探针的设计极其复杂，既要保留丹参素活性母核结构确保生物活性不受影响；又要引入有效的分离基团，确保靶点蛋白能够从复杂体系中分离出来。总之，开发兼顾丹参素活性和分离能力的丹参素生物活性探针(Tanp)，是本领域技术人员急需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明旨在提出一种丹参素衍生的生物活性探针，该探针能在细胞水平鉴定丹参素靶点蛋白，阐明丹参药效机制。

为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：

一种丹参素衍生的生物活性探针，所述探针以丹参素为原料，通过丹参素的侧链羧基与丙炔胺发生酰胺缩合反应修饰而制得。

优选地，所述探针为棕黄色粉末，分子式为C12H13NO4，分子量为235.0770，结构式如下：

本发明的第二目的在于提出一种丹参素衍生的生物活性探针的制备方法，以设计并公开以丹参素为起始原料制备生物活性探针(Tanp)的方法。

为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：

一种丹参素衍生的生物活性探针的制备方法，将丹参素溶于无水二氯甲烷中，加入催化剂，然后缓慢滴加丙炔胺，调节pH至碱性，用淬灭剂猝灭反应，最后萃取，得到丹参素生物活性探针(Tanp)。

优选地，所述丹参素、无水二氯甲烷、丙炔胺的质量比为：1.6～1.9：60～66：1。

优选地，所述催化剂为1-乙基-3(3-二甲基丙胺)碳二亚胺(EDCI)和1-羟基苯并三唑(HOBT)；

优选地，1-乙基-3(3-二甲基丙胺)碳二亚胺(EDCI)、1-羟基苯并三唑(HOBT)、丙炔胺的质量比为：3-3.5：2-2.5：1。

优选地，所述pH调节至7-9。

优选地，所述探针在10^-5～10^-7mol/L浓度范围内具有良好的抗炎活性。

优选地，所述探针在10^-3mol/L以下浓度范围内对细胞活力无显著影响。

本发明的第三目的在于提出所述的丹参素衍生的生物活性探针在丹参素靶点蛋白的鉴定和丹参药效机制的研究的应用。

相对于现有技术，本发明具有以下优点和有益效果：