[发明专利]CLDN18.2结合抗体、探针及在CLDN18.2表达细胞的单细胞测序中的应用

说明书

本发明提供了一种新的抗CLDN18.2的抗体。上述抗体能够以高亲和力和特异性结合CLDN18.2，能够简单地与量子点等荧光物质结合，并且该形式能够在高分选速度下保持其对于CLDN18.2的高亲和力和特异性。此外，本发明还提供一种基于所述探针的CLDN18.2表达细胞的分选方法，其与一般使用抗体探针进行的流式细胞分选相比，具有更好的分选效率和更高的分选准确性，通过该分选方法，可以以极高的可靠性对CLDN18.2表达细胞进行单细胞测序。

技术领域

本发明涉及细胞分选领域。具体而言，本发明涉及结合CLDN18.2的抗体及其与荧光标记物结合特别是与量子点结合的探针形式，及其在治疗单细胞分选特别是流式细胞分选中的应用。

背景技术

包括胃癌及食道癌在内的上消化道肿瘤是一种全球常见，预后较差的恶性肿瘤。胃癌在癌症相关死亡率中排名第三，被认为是全世界最难治愈的癌症之一。在晚期或转移性胃癌或胃食管交界处(GEJ)腺癌患者中，中位总生存期(mOS)不超过10个月。因此，在细胞层面上对胃癌进行研究以获取靶向治疗的新思路在医学上具有极大的意义。近年来，随着单细胞分析技术的发展，对于胃癌分子机理的研究手段越来越多，但同时，这也要求更为精确、更为高通量的细胞分选方法的支持。

紧密连接蛋白(Claudin)家族蛋白是广泛分布于上皮细胞中的紧密连接结构的主要组成部分，其作用是维持控制细胞间分子交换的紧密连接。紧密连接蛋白广泛分布于胃、胰腺和肺组织，可用于诊断和治疗。CLDN18.2的分子量约27.8kd，具有四个跨膜区，且具有两个较短的胞外区EC1和EC2。而与其它紧密连接蛋白家族蛋白不同的是，在正常组织中CLDN18.2非常特异地仅表达于胃部高度分化的上皮细胞中(Tureci O et al.，Gene，2011)。在来源于胃上皮细胞的肿瘤中，有很高比例的肿瘤细胞表面表达CLDN18.2。在胃癌细胞的淋巴结和其它组织转移肿瘤中，也可以检测到高水平的CLDN18.2表达(Woll S.etal.，Int.J.Cancer，2013)。除胃癌外，也有很高比例的胆管癌、食道癌和胰腺癌等肿瘤细胞中表达CLDN18.2。因此，作为特异性表面标志物，CLDN18.2也是一个极具研究利用价值的细胞分选用靶点。

量子点是一种重要的低维半导体材料，其三个维度上的尺寸都不大于其对应的半导体材料的激子玻尔半径的两倍。量子点一般为球形或类球形，其直径常在2-20nm之间。常见的量子点由IV、II-VI，IV-VI或III-V元素组成。具体的例子有硅量子点、锗量子点、硫化镉量子点、硒化镉量子点、碲化镉量子点、硒化锌量子点、硫化铅量子点、硒化铅量子点、磷化铟量子点和砷化铟量子点等。

量子点是一种纳米级别的半导体，通过对这种纳米半导体材料施加一定的电场或光压，它们便会发出特定频率的光，而发出的光的频率会随着这种半导体的尺寸的改变而变化，因而通过调节这种纳米半导体的尺寸就可以控制其发出的光的颜色，由于这种纳米半导体拥有限制电子和电子空穴(Electro n hole)的特性，这一特性类似于自然界中的原子或分子，因而被称为量子点。

与荧光蛋白等荧光标记物相比，量子点具有以下的优点：1、同一激光可激发更多颜色，可以有效地避免蛋白质带来的背景的干扰；2、光稳定性高；3、通道间荧光渗漏小；4、亮度高。

发明内容

本发明所要解决的技术问题

抗体探针能够探测表达特定的目标蛋白的细胞，而流式细胞术可以以较高的精度将抗体探针标记的细胞分选出来，其组合是要从样本中分离出特定细胞群时所使用的主要手段之一，然而，蛋白质造成的背景荧光会对流式细胞术的准确度造成影响，此外由于抗体是从外部结合目标细胞的，并且抗体探针一般结合大分子的荧光标记，其结合活性有时会受到荧光标记的影响(如空间位阻等)，因此在高分选速率的条件下，回收率有降低的倾向。

解决技术问题的技术手段