[发明专利]一种豌豆蛋白源DPP-IV抑制肽及其筛选方法

说明书

本发明公开了一种豌豆蛋白源DPP‑IV抑制肽及其筛选方法，属于食源性活性肽开发技术领域。本发明利用多肽组学与分子对接技术快速筛选DPP‑IV抑制肽，避免了因逐级分离纯化所导致的耗时费力的缺点。所得DPP IV抑制肽IPYWTY具有极高的DPP‑IV抑制活性，可用于制备治疗糖尿病的药物。

技术领域

本发明涉及一种豌豆蛋白源DPP-IV抑制肽及其筛选方法，属于食源性活性肽开发技术领域。

背景技术

根据国际糖尿病联盟(IDF)的数据，2021年全球成年糖尿病患病率约为5.37亿，预计到2045年将达到7.84亿。其中，2型糖尿病(T2D)约占已确诊糖尿病的90％。T2D以高血糖为特征，可导致心血管疾病(中风、心肌梗死、高血压、心力衰竭等)、神经退行性疾病、肾病等一系列并发症。针对以上问题，许多抗糖尿病药物已被开发并用于T2D的治疗，其中DPP-IV抑制剂是最有前景的降糖药物之一。DPP-IV抑制剂通过抑制胰高血糖素样肽-1(GLP-1)和葡萄糖依赖性胰岛素多肽(GIP)等激素的失活而产生降糖作用。GLP-1和GIP可有效刺激胰岛素的分泌，然而其易被DPP-IV降解而迅速失活，从而失去其调节血糖的功能。因此，抑制DPP-IV的活性有利于T2D的治疗。目前已有几种合成DPP-IV抑制剂(如:西格列丁、维格列丁等)获批并用于临床应用。然而，这些合成的DPP-IV抑制剂可能会导致一些不良反应，如胃肠道问题、尿路感染和严重的皮肤反应。此外，其高昂的价格也使得低收入人群难以承担。

作为一种天然、安全的补充剂，食源性DPP-IV抑制肽具有调节葡萄糖稳态的功能。目前，已从多种食品蛋白质中获得了大量高活性的DPP-IV抑制肽，表现出较好的降血糖效果。

但，传统的DPP-IV抑制肽鉴定方法是通过逐级分离纯化，如：超滤、色谱柱分离等手段获得纯度较高的肽段，再通过质谱对其结构进行鉴定，最后通过体外合成并进一步验证其DPP-IV抑制活性。这种方法操作复杂、耗时且费用高。因此，开发一种更加方便、高效、快速的DPP-IV抑制肽的鉴定方法以成为当务之急。

豌豆蛋白是一种低敏、营养且经济的蛋白质资源，通过酶解豌豆蛋白产生活性肽，具有良好的抗氧化、降血糖等生物活性。迄今为止，尚未发现关于豌豆蛋白源DPP-IV抑制肽的报道。

发明内容

[技术问题]

本发明要解决的技术问题是现有食品源DPP-IV抑制肽的分离鉴定方法复杂、成本高，且无豌豆蛋白源的DPP-IV抑制肽。

[技术方案]

本发明提供一种从豌豆蛋白中筛选DPP-IV抑制肽的方法，是利用多肽组学与分子对接技术快速筛选DPP-IV抑制肽，主要包括以下步骤：

(1)利用蛋白酶水解豌豆蛋白产生豌豆肽

将豌豆蛋白粉与水混合，加热使豌豆蛋白受热变性，然后添加蛋白酶对豌豆蛋白进行水解，水解结束后，将豌豆蛋白水解液加热灭酶，然后冷却、离心，取上清冻干；

(2)将步骤(1)所得冻干物经Sephadex G-15进行分离，选择具有相对高的抑制DPP-IV能力的部分进行下一步的测序；

(3)通过多肽组学对步骤(2)分离得到的部分豌豆肽进行测序；

(4)利用分子对接技术从步骤(3)测序得到的豌豆肽中筛选高活性的DPP-IV抑制肽。

在本发明的实施方式中，所述豌豆蛋白粉是指去除豌豆中的淀粉与脂肪后的干燥的蛋白粉末。

在本发明的实施方式中，所述蛋白酶是复合蛋白酶，可以切割豌豆蛋白的多个位点。