[发明专利]一种用于线粒体置换技术的改良显微操作液及其制备方法

说明书

本发明提供了一种用于线粒体置换技术的改良显微操作液及其制备方法。该用于线粒体置换技术的改良显微操作液由细胞松弛素B、二甲亚砜和Vitrolife辅助生殖IVF‑配子处理液配制而成；在该改良显微操作液中，细胞松弛素B的浓度为＞0μg/mL且＜2.5μg/mL。本发明提供的用于线粒体置换技术的改良显微操作液仅通过调整细胞松弛素B的浓度便达到了提高线粒体置换技术的有效性和安全性的目的，操作简单，为彻底阻断线粒体疾病母胎间遗传提供了安全保障。

技术领域

本发明涉及辅助生殖技术领域，具体涉及一种用于线粒体置换技术的改良显微操作液及其制备方法。

背景技术

卵子中的线粒体DNA(mitochondrial DNA，mtDNA)突变引起母系家族性疾病，即遗传性线粒体疾病，目前尚无有效治疗手段。

线粒体置换技术是用健康捐赠者的卵子的卵胞质来替换线粒体遗传病患者含致病mtDNA的卵胞质的一项技术，为这类患者带来了诞生健康后代的福音，有望彻底阻断线粒体疾病母胎间遗传，但其有效性和安全性一直是国内外专家争论的焦点，也是阻碍其临床广泛应用的关键。目前该技术常规使用的显微操作液中含有浓度为5μg/mL的细胞松弛素B(cytochalasin B，CB)来维持生殖细胞质的稳定性，从而保障线粒体置换操作的顺利进行。然而CB是一种真菌分泌的细胞渗透性毒素，具有抑制肌动蛋白聚合，从而破坏细胞骨架的作用。在小鼠和人卵母细胞的显微操作中普遍能观察到一种现象：含浓度为5μg/mL的CB的显微操作液会引起卵母细胞中线粒体朝细胞核聚集或形成团簇状。我们不禁要问，这种非生理现象是否会对线粒体置换技术的有效性和重构胚胎的安全性造成影响呢？细胞核周围的线粒体聚集是否会在核供体取出过程中带入更多的含致病基因的线粒体呢？迄今为止，尚未有研究能确切回答这些问题。由于线粒体遗传疾病的严重程度取决于突变和正常mtDNA的比率，即卵子/胚胎线粒体的异质性，这促使科学家们尝试各种方法使患者卵胞浆内的线粒体异质性尽可能降至最低，包括线粒体自噬、极体移植、基因编辑、提高显微操作机械技术等，但这些方法均昂贵且实施难度高，目前尚未有研究从改良显微操作液中CB的浓度这一简单易行的方法入手，来突破线粒体置换技术有效性和安全性的研究瓶颈。

发明内容

为了克服现有技术中的缺陷，本发明提供了一种用于线粒体置换技术的改良显微操作液及其制备方法，来提高线粒体置换技术的有效性和安全性。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明的第一方面是提供一种用于线粒体置换技术的改良显微操作液，由细胞松弛素B、二甲亚砜和Vitrolife辅助生殖IVF-配子处理液配制而成；在该改良显微操作液中，细胞松弛素B的浓度为＞0μg/mL且＜2.5μg/mL。

进一步地，在该改良显微操作液中，细胞松弛素B的浓度为＞0μg/mL且≤1μg/mL。

进一步地，在该改良显微操作液中，细胞松弛素B的浓度为1μg/mL。

本发明的第二方面提供上述改良显微操作液的制备方法，包括如下步骤：

步骤一，将细胞松弛素B干粉溶解于二甲亚砜中混匀，配成细胞松弛素B 母液；

步骤二，将细胞松弛素B母液加入Vitrolife辅助生殖IVF-配子处理液中使得细胞松弛素B的浓度为＞0μg/mL且＜2.5μg/mL；优选为＞0μg/mL且≤1μg/mL，更优选为1μg/mL。

进一步地，步骤一中的细胞松弛素B母液的浓度为5～15mg/mL。

进一步地，步骤一中的细胞松弛素B母液的浓度为10mg/mL。

本发明的第三方面是提供一种用于线粒体置换疗法的试剂盒，该试剂盒包括上述改良显微操作液。

本发明采用以上技术方案，与现有技术相比，具有如下技术效果：