[发明专利]用于生产外泌体的方法及其所制得的外泌体及其应用

说明书

本发明涉及用于生产外泌体的方法及其所制得的外泌体及其应用。本发明揭示一种用于生产外泌体的方法，其包括：将禽类胚胎间充质干细胞(AMSCs)培养于含有2,3,4′,5‑四羟基二苯乙烯‑2‑O‑β‑D‑葡萄糖苷(THSG)的培养基中，而得到AMSCs的细胞培养物；以及自该细胞培养物中收取外泌体。本发明也揭示由上述方法所制得的外泌体可被用来改善皮肤病况。

技术领域

本发明是有关于一种用于生产外泌体(exosomes)的方法，其包括：将禽类胚胎间充质干细胞(Avian embryo mesenchymal stem cells,AMSCs)培养于含有2,3,4′,5-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(2,3,4′,5-Tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside,THSG)的培养基中，而得到AMSCs的细胞培养物；以及自该细胞培养物中收取外泌体。本发明也有关于使用该外泌体来改善皮肤病况(skin condition)。

背景技术

外泌体(exosomes)是由细胞所分泌出的一种纳米级囊泡(nanosized vesicles)，属于胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)的一种，存在于各种生物液体(biologicalfluids)[包括羊水(amniotic fluid)、尿液(urine)以及血液]中，其中富含蛋白质、脂质、mRNAs以及miRNAs等成分。

尺寸-选择性分离处理(size-selective separation)[例如，过滤(filtration)、透析(dialysis)以及层析法(chromatography)]以及密度-选择性分离处理(density-selective separation)[例如，离心(centrifugation)]皆已被用来将外泌体从干细胞的培养物中分离出，以利外泌体的活性探讨。已有研究指出，不同来源或类型的干细胞所生产出的外泌体分别会具有不同的生物活性。例如，在Wang Y.et al.(2017),Stem CellRes.Ther.,8:189中，Wang Y.等人发现衍生自人类胚胎干细胞-诱导的间充质干细胞(human embryonic stem cell-induced mesenchymal stem cells)的外泌体具有缓解骨关节炎(osteoarthritis)的效用。在Kim Y.J.et al.(2017),Biochem.Biophys.Res.Commun.,493：1102-1108中，Kim Y.J.等人发现衍生自人类脐带血间充质干细胞(human umbilical cord blood mesenchymal stem cells)的外泌体具有促进皮肤回春(skin rejuvenation)的效用。

就申请人所知，迄今尚无任何文献或专利前申请曾经将2,3,4′,5-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(2,3,4′,5-Tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside,THSG)[其是一种存在于何首乌(Polygonum multiflorum)中属于多羟基二苯乙烯类(polyhydroxystilbene group)的活性成分]以及禽类胚胎间充质干细胞(Avian embryomesenchymal stem cells,AMSCs)应用外泌体的生产。

发明内容

于本发明中，申请人发现，使用2,3,4′,5-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(2,3,4′,5-Tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside,THSG)来培养禽类胚胎间充质干细胞(Avian embryo mesenchymal stem cells,AMSCs)能够有效地促进AMSCs细胞生产出大量且含有较多成分种类(包括蛋白质与RNA)的外泌体，且其能够有效地促进皮肤再生(skinregeneration)与伤口愈合(wound healing)、减少皮肤皱纹(skin wrinkles)、改善掉发(hair loss)以及抗皮肤发炎(skin inflammation)，因而被预期能够应用于改善各种皮肤病况(skin condition)。