[发明专利]果糖基氨基酸氧化酶突变体及其应用和产品、基因、质粒和基因工程菌

说明书

本发明提供了一种果糖基氨基酸氧化酶突变体及其应用和产品、基因、质粒和基因工程菌，涉及生物技术领域。本发明提供的果糖基氨基酸氧化酶突变体，将果糖基氨基酸氧化酶的C端6个氨基酸切除。该果糖基氨基酸氧化酶突变体的比酶活力显著提高，具有较好的热稳定性和储存稳定性，能够用于糖化蛋白质，特别是糖化血红蛋白的测定。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种果糖基氨基酸氧化酶突变体及其应用和产品、基因、质粒和基因工程菌。

背景技术

糖尿病作为目前常见的一种疾病之一，医学上对此的检测方法也不断推陈出新。自通过酶法来测定糖化血红蛋白(HbA1c)的方法问世一来之后，以此为基础的测试实际不断在开发之中。该方法是血液蛋白质中包含的糖化蛋白质，作为血糖控制标志物。糖化蛋白质是通过血液中存在的D-葡萄糖与构成血液蛋白质的氨基酸残基反应产生的。血液蛋白质中的主要糖基化位点是赖氨酸残基的ε-氨基和血液蛋白质氨基末端氨基酸的α-氨基。测定HbA1c时，测定D-葡萄糖与血红蛋白β链的氨基末端氨基酸缬氨酸的α-氨基结合产生的糖化蛋白质的量。

果糖基氨基酸氧化酶及其使用方法技术是目前作为糖尿病检测的主要的核心酶原料之一，基于果糖基氨基酸氧化酶开发的血液中的糖化蛋白质的检测方法具备高效简便性，目前也已有较多的商品化检测试剂盒。在酶测定法中，首先，糖化蛋白质被蛋白酶水解；随后，由此产生的果糖基缬氨酸、果糖基赖氨酸和果糖基缬氨酰组氨酸等糖化氨基酸被果糖基氨基酸氧化酶（以下简称“FAOD”）氧化水解；最后，由氧化酶反应产生的过氧化氢通过过氧化物酶-色原反应系统比色测定。在通过酶法测定糖化蛋白质时，作为主要反应酶的FAOD的底物特异性和稳定性是重要的因素。例如，在HbA1c的测定中，需要对果糖基缬氨酸具有高特异性的酶。此外，需要作用于果糖基缬氨酰组氨酸的酶以进行糖化血红蛋白的β链特异性测定。这是因为血红蛋白α链和β链的氨基末端氨基酸都是缬氨酸。因此，为了进行对β链、氨基末端的2个氨基酸残基(即果糖基缬氨酰组氨酸)特异的测定，需要进行识别。

目前，已经从几种丝状真菌或其基因重组体中提取纯化出作用于果糖基缬氨酰组氨酸的氧化酶（果糖基缬氨酰组氨酸氧化酶）。还分离了编码该果糖基缬氨酰组氨酸氧化酶的基因。然而，传统的果糖基缬氨酰组氨酸氧化酶的热稳定性较差，需要进一步提高诊断试剂的长期储存稳定性。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种果糖基氨基酸氧化酶突变体，以解决上述问题中的至少一种。

本发明的第二目的在于提供上述果糖基氨基酸氧化酶突变体在制备糖化蛋白质检测产品中的应用。

本发明的第三目的在于提供一种糖化蛋白质检测产品。

本发明的第四目的在于提供一种编码果糖基氨基酸氧化酶突变体的基因。

本发明的第五目的在于提供一种重组质粒。

本发明的第六目的在于提供一种基因工程菌。

第一方面，本发明提供了一种果糖基氨基酸氧化酶突变体，将果糖基氨基酸氧化酶的C端6个氨基酸切除；

所述果糖基氨基酸氧化酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

作为进一步技术方案，所述果糖基氨基酸氧化酶突变体的氨基酸序列如SEQ IDNO.2所示。

作为进一步技术方案，表达所述果糖基氨基酸氧化酶突变体的核苷酸序列如SEQID NO.3所示。

第二方面，本发明提供了一种果糖基氨基酸氧化酶突变体在糖化蛋白质检测中的应用；

所述糖化蛋白质包括糖化血红蛋白。

第三方面，本发明提供了一种糖化蛋白质检测产品，包括上述果糖基氨基酸氧化酶突变体。