[发明专利]蓖麻蚕EST-SSR分子标记及其应用

说明书

本发明公开了一种蓖麻蚕EST‑SSR分子标记及其应用，属于分子生物学和蚕品种鉴别技术领域。本发明从蓖麻蚕转录组序列获得了EST‑SSR 12个分子标记位点信息，并设计合成了12对扩增效率高、多态性丰富的SSR引物。利用本发明建立的方法，以20份蓖麻蚕种质为材料进行了遗传多样性分析。利用PCR扩增和电泳检测技术可完成SSR标记的检测，可直接应用于蓖麻蚕种质资源的鉴定和遗传多样性分析，在DNA水平揭示各品系的遗传变异，也为分子标记辅助育种奠定了良好的分子基础。

技术领域

本发明属于分子生物学和蚕品种鉴别技术领域，具体涉及蓖麻蚕EST-SSR分子标记及其应用。

背景技术

蓖麻蚕(Philosamia cynthia ricini)又称木薯蚕、印度蚕，是一种具有多化性，在适宜的环境条件下无滞育期的吐丝类经济昆虫。16世纪就已经被印度人驯化饲养，20世纪前后被引进到20多个国家与地区进行饲养繁殖，40年代被引进到我国东北、华东和华南等地。蓖麻蚕是广食性昆虫，除了摄食蓖麻叶外，还可食用木薯、臭椿和马桑等叶片。蓖麻蚕具有发育较快、易饲养、抗病性强、蚕体健壮、背光群集等优点，已经成为我国仅次于家蚕和柞蚕的第三大经济昆虫，亦可作为良好的遗传研究素材。针对蓖麻蚕开展的研究还相对比较少，仅有报道采用ISSR方法在几个品种中检测遗传多样性的分析，但ISSR标记存在重复性差等缺点，目前未见有利用蓖麻蚕转录组序列开发EST-SSR标记的报道。针对蓖麻蚕开展标记选择，用于品种分子甄别，尤其是在生产优良品种的应用显得尤为迫切需要。

微卫星(Microsatellite)又称简单重复序列(Simple Sequence Repeat，SSR)，是基因组组以少数几个核苷酸(多数为2-4个)为单位多次串联重复组成的长达几十个核苷酸的序列。SSR包括基因组SSR(Genomic SSR,gSSR)和表达区EST-SSR(genic-SSR或EST-SSR)。gSSR是基于基因组序列开发的，而EST-SSR则是存在于表达的基因序列内的SSR，不包括内含子及非表达调控区中的SSR位点。由于EST-SSR可利用数据库中的EST序列开发，比基因组SSR更加经济，而且EST-SSR来源于DNA的转录区域，比gSSR标记具有更高的通用性，因此近年来EST-SSR标记在动植物品种资源中得到广泛开发及应用。

发明内容

发明目的：本发明要解决的技术问题是提供蓖麻蚕EST-SSR分子标记。

本发明还要解决的技术问题是提供利用上述蓖麻蚕EST-SSR分子标记设计EST-SSR分子标记引物。

本发明最后要解决的技术问题是提供上述蓖麻蚕EST-SSR分子标记及引物蓖在麻蚕种质资源的鉴定、蓖麻蚕亲缘关系或遗传多样性分析、蓖麻蚕遗传育种中的应用。

技术方案：为解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：

一种蓖麻蚕EST-SSR分子标记，所述EST-SSR分子标记的核苷酸序列如SEQ ID NO:1～12所示。

上述蓖麻蚕EST-SSR分子标记在蓖麻蚕种质资源的鉴定、蓖麻蚕亲缘关系或遗传多样性分析、蓖麻蚕遗传育种中的应用。

蓖麻蚕EST-SSR分子标记引物，所述分子标记引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:13～36所示。

上述蓖麻蚕EST-SSR分子标记引物在蓖麻蚕种质资源的鉴定、蓖麻蚕亲缘关系或遗传多样性分析、蓖麻蚕分子标记辅助育种中的应用。

包含上述蓖麻蚕EST-SSR分子标记引物的试剂盒。

进一步地，在进行PCR反应时，PCR反应体系如下：2.5μL 10×PCR buffer，2μL2.5mmol/L dNTP，1μL 10mmol/L上游引物、1μL 10mmol/L下游引物，0.3μL DNA聚合酶，1μL500ng/μL DNA模板，加入ddH₂O定容到反应终体积25μL；