[发明专利]OCLN基因或其蛋白作为靶点在制备白癜风诊断试剂盒或药物中的应用

说明书

本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及OCLN基因或其蛋白作为靶点在制备白癜风诊断试剂盒或药物中的应用。本发明首次发现了OCLN基因在白癜风患者CD8⁺T细胞中表达异常升高，且OCLN的表达水平与疾病活动性有关，提示其可以成为白癜风检测的生物标志物，并可应用于诊断试剂盒的开发与应用；OCLN检测诊断白癜风能够更加及时反映白癜风患者的疾病活动状态，为白癜风的诊疗提供重要依据。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及OCLN基因或其蛋白作为靶点在制备白癜风诊断试剂盒或药物中的应用。。

背景技术

白癜风(vitiligo)是一种获得性色素脱失性皮肤黏膜疾病，其特征为黑素细胞被选择性破坏，导致皮肤、黏膜和(或)毛发色素脱失。白癜风的发病率约为1％，无种族和性别偏向。白癜风好发于颜面及其它暴露部位，典型的皮疹表现为边界清楚的乳白色色素脱失斑，表面光滑。由于白癜风是一种损容性皮肤病，它容易引起患者强烈的羞耻感，造成患者出现沉重的心理负担。

白癜风的机制尚不明确，目前的研究普遍认为自身免疫是导致白癜风发生和发展的主要机制，遗传、氧化应激以及环境等因素也对白癜风的发生发展有一定影响。其中，CD8⁺ T细胞对于黑素细胞的破坏起着关键作用。CD8⁺ T细胞是T淋巴细胞的一个亚群，在总T淋巴细胞中占20％-30％左右。CD8⁺ T细胞活化后变为细胞毒性T淋巴细胞，能特异性直接杀伤黑素细胞。

OCLN主要表达在内皮细胞，上皮细胞，角质形成细胞等细胞中，编码闭合蛋白(又称封端蛋白)occludin。Occludin与ZO-1，Claudin等蛋白共同组成紧密连接复合体。它是一种四次跨膜蛋白，一侧细胞上的occludin与另一侧细胞上的occludin结合，再通过胞内铆锚定ZO-1、ZO-2、ZO-3、claudin-1等蛋白稳固连接,形成紧密连接复合体。它具有多种生理病理功能，如调节血脑屏障、肠上皮屏障以及皮肤表面屏障的通透性。当OCLN在缺乏紧密连接的细胞中表达时，它能够诱导粘附。已有文献报道，Takahito Saito等的研究表明OCLN在激活的γδT细胞中表达升高，并且参与γδT细胞从表皮到淋巴结的迁移。

越来越多研究表明以occludin为主的紧密连接蛋白在色素性皮肤病里发挥了重要作用。OCLN为白癜风发病机制的研究提供了新的思路，同时也为白癜风的诊疗提供了新的策略。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了OCLN基因或其蛋白作为靶点在制备白癜风诊断试剂盒或药物中的应用。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本专利的申请人通过Illumina HiSeq二代测序，首次从5位白癜风病人皮损和5位正常人皮肤中直接提取CD8⁺ T细胞，进行了微量细胞转录组信息采集和分析，发现OCLN在白癜风皮损中表达升高。

本发明在白癜风外周血CD8⁺ T细胞以及健康对照CD8⁺ T细胞中，通过实时定量PCR检测以及westernblot实验发现，白癜风外周血CD8⁺ T细胞中OCLN基因表达升高。

本发明在10例白癜风皮损CD8⁺ T细胞、10例健康对照皮肤CD8⁺ T细胞中，通过多光谱免疫组化检测发现，白癜风皮损CD8⁺ T细胞中OCLN基因表达升高。

基于上述的试验结果，本发明提出了CD8⁺ T细胞中OCLN基因OCLN基因或其蛋白作为靶点在制备白癜风诊断试剂盒或药物中的应用。

一些实施方案中，所述试剂盒为基于实时荧光定量PCR的检测试剂盒。