[发明专利]壳多糖酶3样蛋白1的测定试剂、试剂盒及定量方法

说明书

本发明提供一种壳多糖酶3样蛋白1的测定试剂，包括以下组分：第一试剂，包括巯基类还原剂、离液离子、表面活性剂、分散剂以及聚乙二醇、缓冲液、防腐剂、螯合剂以及稳定剂；第二试剂，包括多克隆抗体，所述多克隆抗体经化学共价交联固定在载体上。本发明将巯基类还原剂、离液离子、表面活性剂、分散剂以及聚乙二醇组合使用，再配合能够结合壳多糖酶3样蛋白1的多克隆抗体实现对试样中壳多糖酶3样蛋白1含量的快速检测，同时确保测定结果的精度。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，特别涉及一种壳多糖酶3样蛋白1的测定试剂、试剂盒及定量方法。

背景技术

壳多糖酶3样蛋白1(Chitinase3-like protein1，CHI3L1)是一种含383个氨基酸，分子量42.6KD的单体糖基化蛋白，是最早在人成骨细胞中发现的糖蛋白，是几丁质酶蛋白家族的一员。它可以结合壳多糖，但没有壳多糖酶的活性。在炎症和组织重塑中起重要作用。CHI3L1在炎症、纤维化、肿瘤等许多病理情况下表达增加，参与炎症期间组织重塑、介导巨噬细胞浸润、分化和成熟以及血管生成等过程。血清CHI3L1水平在酒精性肝硬化病人中升高，血液中的CHI3L1蛋白与丙肝病毒慢性感染和肝纤维化有关。研究发现在肝硬化患者的血清中，CHI3L1的浓度可显著升高。在肝脏中富集和特异性表达，作为一种高灵敏度高特异性的肝纤维化分期和诊断的血清检测标志物。

我国肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)发生率居于所有肿瘤发生率的第4位，目前肝癌诊断主要依靠影像学检查、血清标志物、穿刺活检等手段。其中血清标志物主要以公认并进入临床应用的甲胎蛋白、甲胎蛋白异质体、异常凝血酶原等为代表，随着蛋白质及分子生物学技术的发展，不断有新的标志物被发现并逐步应用于临床，如microRNA以及磷脂酰肌醇蛋白聚糖、N-糖标志物等，但是仍远远不能满足临床对肝癌早期诊断及疾病分层管理的需求。

壳多糖酶3样蛋白1在多种恶性肿瘤中表达水平升高，包括消化系统的胃癌及肝癌、生殖系统子宫内膜癌、卵巢癌、肺癌、鳞状细胞皮肤癌等，并提示预后不良。CHI3L1可通过促进肿瘤血管生成、增加黏附促进肿瘤侵袭和转移、激活转化生长因子-β/丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶等信号通路在肿瘤的发生发展过程中起调节作用。

血清和组织水平的临床对照研究及分层研究表明，肝癌患者CHI3L1水平表达增加，且与肝癌的CNLC分期和肿瘤大小相关，检测CHI3L1可以更好地评估患者的肿瘤负荷。CHI3L1水平在多种炎症及恶性肿瘤中表达升高且与预后不良有关，在肿瘤患者研究中应始终考虑癌症以外的其他因素(炎症、感染、心血管疾病、糖尿病等)，肝硬化患者外周血CHI3L1水平高于HCC患者，不适用于高危人群(肝硬化)中原发性肝癌的早期发现，因此CHI3L1不能作为肝癌标志物。CHI3L1参与炎症反应和促进细胞外基质重塑，在促进肝纤维化/硬化上的作用已近得到大量文献证实，肝癌的发生是一个渐进式的过程,期间炎症反应、纤维化、肿瘤并存并相互影响。

目前常见的CHI3L1检测方法为ELISA和化学发光方法，对判断肝纤维化的发生、发展、恢复，以及相关癌症筛查和复发判断有很好的参考价值。但上述两种方法均为采用单克隆抗体的固相法，并需标记检测抗体，生产制备繁琐，且不适用高通量全自动生化分析仪应用。

发明内容

基于此，本发明的目的是提供一种壳多糖酶3样蛋白1的测定试剂、试剂盒及定量方法，以至少解决上述相关技术中的不足。

本发明提出一种壳多糖酶3样蛋白1的测定试剂，包括以下组分：

第一试剂，包括巯基类还原剂、离液离子、表面活性剂、分散剂以及聚乙二醇、缓冲液、防腐剂、螯合剂以及稳定剂；

第二试剂，包括多克隆抗体，所述多克隆抗体经化学共价交联固定在载体上。