[发明专利]低共熔溶剂应用于DNA提取、DNA提取方法及试剂盒

说明书

本发明公开了一种低共熔溶剂在DNA提取中的应用，所述低共熔溶剂为氯化胆碱体系低共熔溶剂，尤其是氯化胆碱与氢键供体摩尔比为1:1～5，所述氢键供体包括六氟异丙醇；本发明还公开了一种低共熔试剂提取DNA的方法，采用所述的氯化胆碱体系低共熔溶剂提取全血中DNA，本方法对DNA提取回收率可达95％以上，且提取的DNA浓度在50μg/mL以上，本方法一次性提取获得DNA样本量大，而且高效、安全环保，能够满足大批量实验需求，另外，本发明还公开了一种DNA提取试剂盒，所述DNA提取试剂盒，包括本发明所述的氯化胆碱体系低共熔溶剂。

技术领域

本发明属于生物技术领域，更具体地，涉及低共熔溶剂应用于DNA提取、DNA提取方法及试剂盒。

背景技术

脱氧核糖核酸(DNA)是一种重要的生物分子，包含几乎所有生物体生命所需的遗传物质，是遗传信息的载体，在生命科学领域具有重要的应用价值。从复杂的生物样品中提取DNA是生物学中的一个基本过程，也是启动其他下游活动的基本步骤，如测序、扩增、杂交、连接、克隆和生物检测。从全血中提取DNA是获得生物基因组遗传信息较为简单的方法，也是进行基因相关性研究的重要手段和技术。然而，从含有蛋白质、多糖及各种代谢物的复杂生物样品中提取高质量的DNA是具有很大挑战性，而且提取DNA样本的质量和提取量直接影响着后续实验的准确性。

目前，用有机溶剂提取DNA的传统方法会产生一系列问题，这些问题主要体现在一次提取获得DNA的样本量较少且萃取试剂毒性大。因此，寻找更安全、更高效的DNA提取纯化方法尤为重要。

发明内容

针对现有技术的以上缺陷或改进需求，本发明提供了低共熔试剂应用于DNA提取、DNA提取方法及试剂盒，其目的在于发现低共熔溶剂对全血中DNA的特异性富集作用，应用于提取血液中DNA，由此解决现有提取方法一次性提取DNA量少且提取试剂毒性大的技术问题。

为实现上述目的，按照本发明的一个方面，提供了一种低共熔溶剂在提取DNA中的应用，其所述低共熔溶剂为氯化胆碱体系低共熔溶剂，用作DNA萃取剂。

优选地，所述低共熔溶剂在提取DNA中的应用，其所述氯化胆碱体系低共熔溶剂为氯化胆碱与氢键供体试剂的摩尔比为1:1～5的低共熔溶剂。

优选地，所述低共熔溶剂在提取DNA中的应用，其所述氢键供体试剂为六氟异丙醇。

按照本发明的另一方面，提供了一种低共熔溶剂提取DNA的方法，其包括以下步骤：

取获得的含待提取DNA的细胞裂解液上清液，加入蛋白质变性剂混匀，使蛋白质充分变性沉淀，离心分层；取上清液，加入TE缓冲液、硫酸盐、氯化胆碱体系低共熔溶剂形成双水相萃取体系；混匀，室温静置；待分层后取下层低共熔溶剂相，加水反萃取，离心分层，获取上清液；所述上清液含提取的DNA。

优选地，所述低共熔溶剂提取DNA的方法，其所述双水相萃取体系，其中硫酸盐浓度0.08～0.5g/mL；氯化胆碱体系低共熔溶剂体积占比为60～400μL/mL。

优选地，所述低共熔溶剂提取DNA的方法，其所述硫酸盐为硫酸铵、硫酸钠、硫酸镁、或硫酸氢钠的一种或多种组合，其中硫酸铵或硫酸氢钠，浓度为0.12～0.5g/mL；所述硫酸钠或硫酸镁，浓度为0.08～0.5g/mL。

优选地，所述低共熔溶剂提取DNA的方法，其所述氯化胆碱体系低共熔溶剂，其氢键供体为六氟异丙醇，两者摩尔比为1:1～5。

优选地，所述低共熔溶剂提取DNA的方法，其所述加水混匀为按照体积比1:1～4加水混匀。

优选地，所述低共熔溶剂提取DNA的方法，其所述氯化胆碱体系低共熔溶剂，按照以下制备方法获得：