[发明专利]经过修饰的T细胞及其制备和使用方法

权利要求书

1.一种经过修饰的原代人类T细胞，其包含经过修饰的基因组，所述基因组包含：

(a)第一基因组修饰，其中染色体2上的细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA4)基因已经被编辑以缺失基因组DNA的第一连接延伸段，由此减少或消除所述细胞中的CTLA4受体表面表达和/或活性；

(b)第二基因组修饰，其中染色体2上的程序性细胞死亡1(PD1)基因已经被编辑以缺失基因组DNA的第二连接延伸段，由此减少或消除所述细胞中的PD1受体表面表达和/或活性；

(c)(i)第三基因组修饰，其中染色体14上的编码T细胞受体(TCR)α链基因座的基因已经被编辑以缺失基因组DNA的第三连接延伸段，和/或

(c)(ii)第四基因组修饰，其中染色体7上的编码TCRβ链基因座的基因已经被编辑以缺失基因组DNA的第四连接延伸段，由此减少或消除所述细胞中的TCR表面表达和/或活性；和

(d)第五基因组修饰，其中染色体15上的β2-微球蛋白(B2M)基因已经被编辑以缺失基因组DNA的第五连接延伸段，由此减少或消除所述细胞中的MHCI类分子表面表达和/或活性；

其中各基因组修饰包括使所述细胞与核酸酶接触，和

各细胞任选地包含：

(e)(i)至少一种嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体特异性地结合于在受损细胞、发育不良细胞、受感染细胞、免疫原性细胞、发炎细胞、恶性细胞、化生细胞、突变细胞和其组合中的至少一者的表面上表达的所关注的抗原或表位；或编码所述至少一种嵌合抗原受体的外源核酸，和/或

(e)(ii)至少一种外源蛋白，所述外源蛋白调节在相邻细胞、组织或器官中的所关注的生物效应；或编码所述蛋白的外源核酸。

2.如权利要求1所述的细胞，其中：

(a)在所述第一基因组修饰中，染色体2上的细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA4)基因已经被编辑以缺失基因组DNA的第一连接延伸段，所述第一连接延伸段包含侧接相邻上游外显子的至少一部分和相邻下游外显子的至少一部分的内含子，并且在所述缺失的基因组DNA的第一连接延伸段的5’端上游的所述基因组DNA的3’端共价地接合于在所述缺失的基因组DNA的第一连接延伸段的3’端下游的所述基因组DNA的5’端以产生染色体2上缺乏所述基因组DNA的第一连接延伸段的经过修饰的CTLA4基因，由此减少或消除所述细胞中的CTLA4受体表面表达和/或活性；和/或

(b)在所述第二基因组修饰中，染色体2上的程序性细胞死亡1(PD1)基因已经被编辑以缺失基因组DNA的第二连接延伸段，所述第二连接延伸段包含侧接相邻上游外显子的至少一部分和相邻下游外显子的至少一部分的内含子，并且在所述缺失的基因组DNA的第二连接延伸段上游的所述基因组DNA的3’端共价地接合于在所述缺失的基因组DNA的第二连接延伸段的3’端下游的所述基因组DNA的5’端以产生染色体2上缺乏所述基因组DNA的第二连接延伸段的经过修饰的PD1基因，由此减少或消除所述细胞中的PD1受体表面表达和/或活性。

3.如权利要求1至2中任一项所述的细胞，其中：

(c)(i)在所述第三基因组修饰中，染色体14上的编码T细胞受体(TCR)α链基因座的基因已经被编辑以缺失基因组DNA的第三连接延伸段，所述第三连接延伸段包含编码外显子的至少一部分，和/或

(c)(ii)在所述第四基因组修饰中，染色体7上的编码TCRβ链基因座的基因已经被编辑以缺失基因组DNA的第四连接延伸段，所述第四连接延伸段包含编码外显子的至少一部分，由此减少或消除所述细胞中的TCR表面表达和/或活性。

4.如权利要求1至3中任一项所述的细胞，其中所述T细胞选自由细胞毒性T细胞、辅助性T细胞、记忆T细胞、调节T细胞、组织浸润淋巴细胞和其组合组成的组。

5.如权利要求1至4中任一项所述的细胞，其中所述细胞是获自患有选自由自身免疫病症、癌症、慢性传染病和移植物抗宿主疾病(GVHD)组成的组的病症、正在治疗所述病症、被诊断患有所述病症、处于发展所述病症的风险中或疑似患有所述病症的受试者。