[发明专利]环状RNA circBRD7在制备鼻咽癌诊断和/或治疗制剂中的应用

说明书

本发明公开了环状RNA circBRD7在制备鼻咽癌诊断和/或治疗制剂中的应用。该环状RNA circBRD7可以用于制备鼻咽癌患者的诊断和治疗制剂，特别是制备出原位杂交检测法用于诊断鼻咽癌患者的试剂盒。通过研究证实circBRD7在鼻咽癌组织及鼻咽癌细胞系中表达下调，与鼻咽癌患者的临床进展负相关。此外，circBRD7在鼻咽癌中发挥抑瘤基因功能，外源过表达circBRD7能够弥补鼻咽癌细胞及组织中circBRD7的不足，从而达到逆转鼻咽癌恶性表型的目的。因此，基于circBRD7的表达检测和外源过表达可用于鼻咽癌患者的早期分子诊断、进展评估和临床靶向治疗，具有重要的临床价值和推广应用前景。

技术领域

本发明属于肿瘤分子生物学领域，具体涉及一种环状RNA circBRD7的原位杂交探针、表达载体以及circBRD7用于鼻咽癌诊断和治疗的制剂。

背景技术

鼻咽癌是一种起源于鼻咽部上皮细胞的恶性头颈部肿瘤，有明显的区域聚集性，恶性程度高，具有强大的侵袭转移能力。虽然近年来临床和实验肿瘤学在鼻咽癌诊断方面有了很大的发展，但鼻咽癌患者的预后并没有明显的提高，局部复发和远处转移仍是鼻咽癌晚期患者生存率低的主要原因。早期鼻咽癌患者对放化疗非常敏感，有非常好的临床疗效；但由于鼻咽癌患者的发病位置隐蔽、早期症状不典型，许多鼻咽癌患者初诊就是晚期，错过了最佳的临床治疗阶段，因而很容易发生放化疗抵抗和远处转移。因此，鼻咽癌的早期诊断和个体化治疗在鼻咽癌的临床诊断和治疗中非常关键，但目前临床上尚无鼻咽癌早期诊断和进展评价的筛选标志物，确切需要研发和建立一种用于鼻咽癌早期诊断和进展评价的诊断方法。

Circular RNAs(circRNAs)是一类具有调节能力的新型的非编码RNA，既缺少5’帽子也没有3’poly(A)尾，是前体mRNA通过外显子、内含子反向剪接或由外显子内含子二者共同融合到共价闭合环中产生的，这个过程不同于线性RNA的生成。CircRNA最早在1976年于RNA病毒中首次发现，随后Hsu MT等人使用电子显微镜技术在猴的肾细胞质中发现了circRNA的存在。随着高通量测序和生物信息学的发展，近年来已经发现了数千个环状RNA，其中许多环状RNA以组织特异性和疾病特异性的方式表达。相较于传统的线性RNA，环状RNA具有稳定性、保守性和功能多样性等生物学特征，能在离体的组织和细胞中相对稳定地保持其来源组织的表达特征，且操作相对简单。因此，筛选和验证更多的新型circRNA作为肿瘤诊断和治疗的生物标志物及其应用，并能尽早在专利领域得到有效的保护，能显著提升我国在该技术领域的国际竞争力。

本发明中我们证实了circ_0039345是由BRD7基因的6-8号外显子反向剪切而成，全长420bp，证实了circ_0039345真实存在于鼻咽癌细胞中，因此将其命名为circBRD7。此外，我们设计并合成了用于扩增circBRD7全长的引物，构建了circBRD7的过表达载体，成功表达出完整的环状RNA circBRD7，弥补了鼻咽癌细胞和组织中circBRD7的不足；并发现circBRD7的表达与鼻咽癌的发生发展密切相关，作为抑瘤基因参与了鼻咽癌的发生发展，因此circBRD7有可能成为鼻咽癌的诊断和治疗的重要分子靶点。

发明内容

本发明证实了circBRD7是由BRD7基因的6-8号外显子反向剪切而成，全长420bp，在鼻咽癌组织中及鼻咽癌细胞系中表达下调，与鼻咽癌患者的临床进展负相关，可用于鼻咽癌患者的辅助诊断和治疗。

本发明的首要目的是提供检测环状RNA circBRD7的试剂在制备鼻咽癌辅助诊断制剂中的应用，该环状RNA circBRD7的序列见SEQ NO:1。

所述的鼻咽癌辅助诊断的制剂包括原位杂交检测试剂。

所述的原位杂交检测试剂中包括用于原位杂交检测circBRD7表达的寡核苷酸探针，优选序列如下：

circBRD7探针:

5’-TAGTTTGAAGTTATCCTGACTGTTCACAAG-3’，序列见SEQ NO:2。