[发明专利]重组腈水解酶的生产及固定化方法及其对乙腈的降解应用有效
| 申请号： | 202210310345.1 | 申请日： | 2022-03-28 |
| 公开（公告）号： | CN114410669B | 公开（公告）日： | 2022-06-17 |
| 发明（设计）人： | 邱建贺;翁雯;周国彪 | 申请（专利权）人： | 佛山市玉凰生态环境科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/55 | 分类号： | C12N15/55;C12N9/78;C12N15/75;C12N15/62;C07K19/00;C12N11/12;C02F3/34;C12R1/125;C02F101/38 |
| 代理公司： | 广州集睿知识产权代理事务所(普通合伙) 44776 | 代理人： | 王英 |
| 地址： | 528299 广东省佛山市南海区桂城街*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 重组 水解 生产 固定 方法 及其 降解 应用 | ||
1.一种编码腈水解酶重组蛋白Cbd-Nit20的核苷酸，其特征在于，所述编码腈水解酶重组蛋白Cbd-Nit20的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.腈水解酶重组蛋白Cbd-Nit20，其特征在于，所述腈水解酶重组蛋白Cbd-Nit20的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
3.权利要求1所述的编码腈水解酶重组蛋白Cbd-Nit20的核苷酸的用途，其特征在于，所述用途是将SEQ ID NO.1所示的核苷酸与其它DNA元件经基因合成后构成如SEQ ID NO.3所示的完整表达框，构建至重组表达质粒，并转入枯草芽孢杆菌宿主细胞，用于重组腈水解酶的分泌表达。
4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述重组表达质粒为pMK-CbN20，pMK-CbN20的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
5.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述其它DNA元件编码的多肽序列为三段不同功能肽的结合，第一段为蛋白分泌的信号肽，第二段为识别并结合纤维素的结合域，第三段为连接腈水解酶催化结构域与纤维素结合域的连接肽，所述的多肽序列如SEQ ID NO. 5所示。
6.如权利要求4所述的用途，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌宿主细胞为
7.如权利要求2所述的腈水解酶重组蛋白Cbd-Nit20的固定方法，其特征在于，所述方法是利用木浆纤维素多孔材料对腈水解酶重组蛋白Cbd-Nit20进行吸附固定，通过多孔木浆纤维素柱，利用腈水解酶重组蛋白Cbd-Nit20与纤维素的亲合能力进行酶的固定化。
8.如权利要求7所述的腈水解酶重组蛋白Cbd-Nit20的固定方法制备固定化后的腈水解酶重组蛋白Cbd-Nit20的用途，其特征在于，所述的固定化后的腈水解酶重组蛋白Cbd-Nit20用于对有机腈类物质的生物降解，将结合了重组腈水解酶Cbd-Nit20的多孔木浆纤维素柱固定并连通含有乙腈的水体中，对含乙腈污染水体进行降解处理。
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