[发明专利]一种用于碱性磷酸酶检测的可视化检测方法

说明书

本发明公开了一种用于碱性磷酸酶检测的可视化检测方法，包括以下步骤：S1：提供4‑氨基苯磷酸钠盐、琼脂糖及缓冲液，将所述4‑氨基苯磷酸钠盐与所述琼脂糖添加至所述缓冲液中，获得第一混合液；S2：加热搅拌使所述第一混合液中的所述琼脂糖充分融化后，将液体倒入模具，冷却形成第一固态交联物；S3：在所述第一固态交联物表面添加待测碱性磷酸酶，加热生成第二固态交联物；S4：在所述第二固态交联物表面添加(3‑氨基丙基)三甲氧基硅烷液体，继续加热生成第三固态交联物；S5：将所述第三固态交联物置于紫外分析仪下，在365nm激发光下观察所述第三固态交联物的荧光颜色。

技术领域

本申请涉及酶检测技术领域，尤其涉及一种用于碱性磷酸酶检测的可视化检测方法。

背景技术

碱性磷酸酶(ALP)是一种哺乳动物组织中的重要水解酶，具有催化磷酸酯的水解和磷酸化功能。作为医疗诊断的关键生物标记物，ALP主要存在于肝脏、肾脏、肠道、骨骼和血清中，健康成人血清中ALP浓度大小范围为46～190mU/mL，若表达水平异常，会造成心力衰竭、肾功能恶化、肝功能障碍、胆汁淤积、血管钙化、骨病和乳腺癌等疾病。为了保护人类健康，对ALP进行早期诊断与检测是迫在眉睫的事情。迄今为止，对ALP的检测方法主要包括：比色法、表面增强拉曼散射法、电化学分析法和色谱分析法等。在这些检测方法中，荧光检测技术因其固有的优势，如高灵敏度、实时检测和原位成像的特点而被广泛关注。目前，有机荧光分子、半导体量子点、金纳米簇、铜纳米簇等多种荧光材料被用于ALP的检测中。但是有机荧光探针水溶性较差，半导体量子点毒性较大，荧光共聚物制备步骤复杂且费时，贵金属纳米簇成本较高且稳定性差。因此，开发能够简便、灵敏检测ALP活性的方法是当前研究的重点。

水凝胶是高分子聚合物经化学键合或物理缠绕交联而成的，以水为分散介质的具有三维网络结构的高分子材料。琼脂糖是重要的水溶性聚合物之一，具有良好的亲水性，并几乎完全不存在带电基团，对敏感的生物大分子极少引起变性和吸附，是理想的惰性载体。琼脂糖水凝胶不仅具有良好的生物相容性，还具有可降解性和无毒性。基于荧光探针制备的水凝胶传感器，可以利用原位生成碳点的荧光信号，用于酶活性的可视化检测。

发明内容

针对现有技术中的缺陷，本发明提出了一种用于碱性磷酸酶检测的可视化检测方法，包括以下步骤：

S1：提供4-氨基苯磷酸钠盐、琼脂糖及缓冲液，将所述4-氨基苯磷酸钠盐与所述琼脂糖添加至所述缓冲液中，获得第一混合液；

S2：加热搅拌使所述第一混合液中的所述琼脂糖充分融化后，将液体倒入模具，冷却形成第一固态交联物；

S3：在所述第一固态交联物表面添加待测碱性磷酸酶，加热生成第二固态交联物；

S4：在所述第二固态交联物表面添加(3-氨基丙基)三甲氧基硅烷液体，继续加热生成第三固态交联物

S5：将所述第三固态交联物置于紫外分析仪下，在365nm激发光下观察所述第三固态交联物的荧光颜色。

在其中一个实施例中，所述第一混合液中4-氨基苯磷酸钠盐溶液的浓度为1-100mM，所述琼脂糖占所述第一混合液中的质量的0.5％-5％。

在其中一个实施例中，所述步骤S2的加热温度为100-160℃，加热时间为5-10min。

在其中一个实施例中，所述步骤S3的加热温度为40-90℃，加热时间为15-120min。

在其中一个实施例中，所述步骤S4的加热温度为30-90℃，加热时间为10-100min。

在其中一个实施例中，所述(3-氨基丙基)三甲氧基硅烷液体与所述第一固态交联物的体积比为1:2-1:1。

在其中一个实施例中，所述缓冲液为二乙醇胺缓冲液、伯瑞坦-罗宾森缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液中的任意一种，且所述缓冲液的pH值为8.0-10.2。