[发明专利]双重特异性抗体

权利要求书

1.制备包含可变重链结构域(V_H)和可变轻链结构域(V_L)的双重特异性抗体或其抗原结合片段的方法，其中双重特异性抗体的V_H和V_L配对在一起形成与第一表位和第二表位特异性结合的抗原结合位点，所述方法包括步骤：

(a)提供包含V_H和V_L的抗体，其中V_H和V_L配对在一起形成与第一表位结合但不与第二表位结合的抗原结合位点，并且其中所述抗体在V_L的位置32、50或91包含至少一个带静电或疏水的氨基酸；

(b)改变编码步骤(a)的抗体的V_H的核酸序列，其中改变一个或多个溶剂可及性氨基酸残基；

(c)表达V_L和步骤(b)的改变的V_H；和

(d)选择包含步骤(c)的该V_L和改变的V_H的双重特异性抗体或其抗原结合片段，其中该V_H和V_L配对在一起形成与第一表位和第二表位特异性结合的抗原结合位点。

2.根据权利要求1所述的方法，其中在位置32、50或91处的至少两个氨基酸是带静电或疏水的。

3.根据权利要求1所述的方法，其中在位置32、50和91处的全部三个氨基酸是带静电或疏水的。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中带静电残基是酪氨酸。

5.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中疏水性残基是色氨酸。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中基于多个天然存在的重链氨基酸序列的多样性，改变编码V_H的核酸序列。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中溶剂暴露残基的位置是选自V_H的位置33、34、50-58和95-97的氨基酸残基位置。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，还包括改变编码步骤(a)的抗体的V_L的核酸序列，其中改变一个或多个溶剂可及性氨基酸残基。

9.根据权利要求8所述的方法，其中溶剂暴露残基的位置是选自V_H的氨基酸93-96的氨基酸残基位置。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中在步骤(d)的选择过程中，改变的V_H与V_L展示在噬菌体上。

11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中步骤(a)的抗体包含：包含氨基酸序列KASQSVINDAA(SEQ ID NO:9)的轻链可变区互补决定区CDRL1、包含氨基酸序列YTSHRYT(SEQ ID NO:10)的CDRL2和包含氨基酸序列QQDYTSPWTF(SEQ ID NO:11)的CDRL3。

12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中步骤(a)的抗体包含：包含氨基酸序列DYSMH(SEQ ID NO:13)的重链可变区互补决定区CDR H1、包含氨基酸序列VWINTETGEPTYADDFK(SEQ ID NO:17)的CDR H2、和包含氨基酸序列GGIFYGMDY(SEQ ID NO:20)的CDR H3。

13.根据权利要求1-12中任一项所述的方法，其中步骤(d)的双重特异性抗体的抗原结合位点互斥地结合第一表位和第二表位。