[发明专利]检测禽脑脊髓炎病毒的组合物及其应用

说明书

本发明公开了检测禽脑脊髓炎病毒的组合物及其应用，属于微生物的测定或检验方法其所用的组合物技术领域。本发明提供检测或辅助检测禽脑脊髓炎病毒的组合物，所述组合物包括禽脑脊髓炎病毒特异引物探针，所述禽脑脊髓炎病毒引物探针包括引物AEV‑F和引物AEV‑R、探针AEV‑Probe，所述引物AEV‑F为核苷酸序列是序列表中SEQ ID No.2的单链DNA；所述引物AEV‑R为核苷酸序列是序列表中SEQ ID No.3的单链DNA；所述探针AEV‑Probe的核苷酸序列是序列表中SEQ ID No.4。特异性和灵敏性测定结果表明，本发明提供的组合物灵敏性高，特异性强，适用于低拷贝样品的检测。

技术领域

本发明属于微生物的测定或检验方法其所用的组合物技术领域，具体涉及检测禽脑脊髓炎病毒的组合物及其应用。

背景技术

禽脑脊髓炎(avian encephalomyelitis,AE)又称流行性震颤，是由禽脑脊髓炎病毒(avian encephalomyelitis virus,AEV)引起的青年鸡、雉鸡、鹌鹑和火鸡的一种急性、高度接触性传染病。该病通过消化道感染家禽，侵害鸡的中枢神经系统和其它实质性器官，病毒经蛋垂直传播，导致孵化率下降，感染雏鸡在1-7日龄出现震颤、运动失调等症状，随着鸡日龄的增长，这些临床神经症状慢慢不表现。另外，病毒感染产蛋鸡，可导致产蛋鸡产蛋量轻微下降，对养禽业尤其是种禽饲养业危害极大。因此在产业中建立检测APV的方法具有重要的现实意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题是如何实现低滴度禽脑脊髓炎病毒的检测。

为解决上述技术问题，第一个方面，本发明提供一种检测或辅助检测禽脑脊髓炎病毒的组合物，所述组合物包括禽脑脊髓炎病毒特异引物探针，所述禽脑脊髓炎病毒引物探针包括引物AE-F和引物AE-R、探针AE-Probe，

所述引物AE-F为核苷酸序列是序列表中SEQ ID No.2的单链DNA；

所述引物AE-R为核苷酸序列是序列表中SEQ ID No.3的单链DNA；

所述探针AE-Probe的核苷酸序列是序列表中SEQ ID No.4。

进一步地，上述的组合物中，所述AE-F、AE-R、AE-Probe的物质的量比值为2:2:1。

进一步地，上述的组合物中，所述组合物还包括阳性标准品质粒。

进一步地，上述的的组合物中，所述阳性标准品质粒包括核苷酸序列如SEQ IDNo.1所示的DNA分子。

进一步地，上述的组合物中，所述引物探针可单独包装或混合包装。

进一步地，上述的组合物中，所述阳性标准品质粒单独包装。

本发明中，所述AE-Probe为特异性识别禽脑脊髓炎病毒的探针，所述AE-Probe的5'端连接有荧光基团，3'端连接有淬灭基团。

荧光基团可选自但不限于FAM(5/6-羧基荧光素)、VIC(绿色荧光蛋白)、TET(四氯-6-羧基荧光素)、JOE(2，7-二甲基-4，5-二氯-6-羧基荧光素)、HEX(六氯-6-甲基荧光素)、Cy3、TAMRA(6-羧基四甲基若丹明)、ROX(羧基-X-罗丹明)、Texas Red、LC RED640、Cy5(花菁染料)、LC RED705、FITC(异硫氰酸荧光素)等常见荧光基团，进行双重PCR检测引物组合物中探针的荧光基团的选择原则是两个荧光的显色不同即可。

所述淬灭基团可选自TAMRA、BHQ1、BHQ2、BHQ3、MGB、Dabcy1中的至少一种。

为解决上述技术问题，第二个方面，本发明提供上述的组合物在下述A1)-A6)中的应用，

A1)检测或辅助检测禽脑脊髓炎病毒；