[发明专利]一种水牛卵巢皮质体外培养用激活培养基及体外培养方法

权利要求书

1.一种水牛卵巢皮质体外培养用激活培养基，其特征在于，所述激活培养基是在体外基础培养基中外加bpv(hopic)，其中所述bpv(hopic)的浓度为150μM。

2.根据权利要求1所述水牛卵巢皮质体外培养用激活培养基，其特征在于，50mL所述体外基础培养基含有以下成分：

所述液体培养基补充剂中含有浓度为1.0mg/mL的人重组胰岛素，浓度为0.55mg/mL的人转铁蛋白以及浓度为0.5μg/mL的亚硒酸钠。

3.一种体外培养水牛卵巢皮质的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)水牛卵巢的选择及准备：从屠宰场刚屠宰的雌性水牛腹腔中采集卵巢，生理盐水清洗表面后立即放入37℃的高压灭菌处理后的生理盐水中，1小时内运回实验室；

(2)分离卵巢皮质，将水牛卵巢的周边修整干净后从韧带部分沿纵轴一分为二，去除掉髓质、白膜后，然后将卵巢皮质分离出来,将分离出的卵巢皮质切成4mm×3mm×1mm的窄条并置于分离培养基中，备用；

(3)水牛卵巢皮质的体外培养

首先将细胞培养小室放入六孔板中，加入权利要求1或权利要求2所述激活培养基，液面以正好没过培养小室底部的交换滤膜为宜；然后将细胞培养小室放入温度为39℃、5％CO₂、相对湿度95％的培养箱中，备用；

取出置于分离培养基中的水牛卵巢皮质，并置于细胞培养小室的交换滤膜上，并置于上述培养箱中进行激活培养24小时；

激活培养后将细胞培养小室中的激活培养基换成体外基础培养基，然后放入上述培养箱中继续培养6天，每隔两天换一次体外培养基础液。

4.根据权利要求1所述体外培养水牛卵巢皮质的方法，其特征在于，50mL所述分离培养基中含有以下成分：