[发明专利]一种提高酿酒酵母DNA片段转化效率的方法

权利要求书

1.一种提高酿酒酵母DNA片段转化效率的方法，其特征在于，具体如下：

(1)合成目的DNA片段：将0.1-100kb的DNA片段，或20kb-1Mb待合成的大分子片段分级拆分成若干0.1-100kb的片段，进行合成；

(2)将步骤(1)的DNA片段或拆分后的片段进行甲基化修饰；

(3)将经过甲基化修饰的DNA片段、或将经过甲基化修饰的拆分后DNA片段，以及线性化的质粒共同转化入酵母细胞进行组装或转化。

2.如权利要求1所述的一种提高酿酒酵母DNA片段转化效率的方法，其特征在于，所述DNA片段可以是线性化DNA，也可以是环化的质粒DNA。

3.如权利要求1所述的一种提高酿酒酵母DNA片段转化效率的方法，其特征在于，所述甲基化修饰是通过甲基转移酶处理获得，所述甲基转移酶可以是以下甲基转移酶中的至少一种：CpG甲基转移酶、GpC甲基转移酶、dam甲基转移酶、dcm甲基转移酶，EcoRI甲基转移酶、HpaII甲基转移酶、MspI甲基转移酶、HhaI甲基转移酶、Taq I甲基转移酶、AluI甲基转移酶、BamHI甲基转移酶、HaeIII甲基转移酶、DpnM甲基转移酶、人DNA甲基转移酶、EcoGII甲基转移酶等具有甲基化修饰DNA的酶。

4.如权利要求3所述的一种提高酿酒酵母DNA片段转化效率的方法，其特征在于，所述甲基化酶由CpG甲基转移酶、GpC甲基转移酶、Taq I甲基转移酶、DpnM甲基转移酶中的2种酶组合或3种酶组合或4种酶组合。

5.如权利要求4所述的一种提高酿酒酵母DNA片段转化效率的方法，其特征在于，所述甲基化酶由CpG甲基转移酶、GpC甲基转移酶、Taq I甲基转移酶、DpnM甲基转移酶按酶活4:3:1:2的比例进行组合。

6.如权利要求1所述的一种提高酿酒酵母DNA片段转化效率的方法，其特征在于，甲基化修饰的50μL反应体系如下：加入2-5μgDNA片段与1-10U甲基转移酶混合，加入终浓度80～160μM的S-腺苷甲硫氨酸，5μL 10×的反应缓冲液，ddH₂O补足到50μL，37-65℃水浴反应1-5h。

7.如权利要求1所述的一种提高酿酒酵母DNA片段转化效率的方法，其特征在于，所述DNA片段设计有连接质粒的同源臂，拆分片段之间设置有能够顺序连成全长片段的同源臂。

8.如权利要求1所述的一种提高酿酒酵母DNA片段转化效率的方法，其特征在于，所述质粒可以是任意一种酵母载体或酵母、大肠杆菌穿梭载体，包括但不限于pGADT7、pGBKT7、pRS415、pPICZC、pYX212。

9.如权利要求1所述的一种提高酿酒酵母DNA片段转化效率的方法，其特征在于，所述转化方法包括但不限于PEG-LiAc法、电转化法。