[发明专利]一种含CCL1的融合蛋白、制备方法及应用

说明书

本发明公开了一种含CCL1的融合蛋白、制备方法及应用，所述融合蛋白，自N端至C端依次包括：IgE信号肽、CCL1、linker和抗原，或IgE信号肽、CCL1、linker、抗原和T2片段，所述T2片段的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。本发明利用CCL1与DC细胞等免疫细胞表面受体的趋化结合能力将不同的抗原蛋白转运交叉呈递到DC细胞表面，提高了各种抗原蛋白被DC细胞吞噬、加工、呈递的效率，改善了其防治相关疾病的效果。本发明中的T2序列经实验测定其具有非常强的免疫增强效果，可以在促进抗原呈递的过程中进一步激发体液和细胞免疫反应，最终达到抑制相关肿瘤生长的效果。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体来说，涉及一种含CCL1的融合蛋白、制备方法及应用。

背景技术

树突状细胞（Dendritic cells，DC）是机体功能最强的专职抗原递呈细胞(Antigen presenting cells，APC)，它能高效地摄取、加工处理和递呈抗原，未成熟DC具有较强的迁移能力，成熟的DC细胞可以以多种细胞表面蛋白与T细胞结合，并使之激活，将DC细胞本身捕获到的抗原蛋白表位肽最终交叉呈递给T细胞并促使其分化为抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞。最终发挥细胞免疫过程对抗原物质进行识别和降解。

肿瘤疫苗通过免疫增强已有的抗肿瘤反应或启动初始T细胞来诱导患者的效应T细胞功能，抗原特异性CD8+细胞毒性T淋巴细胞（CTL）在抗肿瘤过程中发挥重要作用。DC细胞是唯一能激活初始CD8+T细胞的专职抗原呈递细胞，对细胞外肿瘤抗原通过MHC-I进行摄取、加工和交叉提呈，对产生有效的CTL至关重要。因此，通过偶联DC细胞表面分子将肿瘤抗原递送至DC细胞是有效诱导CD8+T细胞免疫应答的肿瘤治疗策略。

目前，已经探明的能够对DC细胞的递呈起到曾强作用的分子包括XCL-1，但仍亟待探明更多的能够起到促进递呈作用的DC细胞表面分子。

发明内容

针对相关技术中的上述技术问题，本发明提出一种含CCL1的融合蛋白、制备方法及应用，能够克服现有技术的上述不足。

为实现上述技术目的，本发明的技术方案是这样实现的：

一种融合蛋白，自N端至C端依次包括：IgE信号肽、CCL1、linker和抗原。

本发明还提供了另外一种融合蛋白，自N端至C端依次包括：IgE信号肽、CCL1、linker、抗原和T2片段，所述T2片段的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。

优选地，所述抗原来自病毒、病原菌和/或肿瘤；所述病毒包括HPV、EBV、HCV、HIV、HBV、VZV或冠状病毒中的至少一种；所述肿瘤包括肝癌、宫颈癌、卵巢癌、肺癌、头颈癌、前列腺癌、乳腺癌、血癌、卵巢癌、结直肠癌中的至少一种。

优选地，所述IgE信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示，所述CCL1的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，所述linker为（G5S）n，其中n为1~10；所述抗原为HPV16的E6蛋白和/或HPV16的E7蛋白，所述HPV16的E6蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述HPV16的E7蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

本发明还提供了编码所述融合蛋白的核酸。

所述核酸的核苷酸序列如SEQ ID NO：9所示。

本发明还提供了含有所述核酸的表达载体，其包括骨架载体和编码所述融合蛋白的核酸。

本发明还提供了转化或转染所述载体的宿主。

本发明还提供了一种所述融合蛋白的制备方法，包括：培养含有编码所述融合蛋白的基因表达载体的宿主，获得含有所述融合蛋白的培养物。