[发明专利]一种对甘薯小象甲进行RNAi的方法及装置

说明书

本发明涉及生物技术领域，具体公开了一种甘薯小象甲RNAi装置，还公开了一种对甘薯小象甲进行RNAi的方法，包括以下步骤：根据靶标基因的序列设计和合成dsRNA；取甘薯小象甲成虫置于的甘薯小象甲RNAi装置中，盖上盒盖；将dsRNA、乙二胺四乙酸与人工饲料混合得到饲喂材料，将饲喂材料通过加样孔加到盒体内底部，盖上孔盖；在25~28℃下饲养7~11d，完成对甘薯小象甲靶基因表达的RNA干扰。本发明的对甘薯小象甲进行RNAi的方法中，采用饲喂法在特定的RNAi装置中对甘薯小象甲进行RNAi，具有干扰效率高、成功率高，有效解决了较小虫体且具有鞘壳注射法进行RNAi死亡率高的问题，为今后进一步防治甘薯小象甲打下了基础。

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别涉及一种对甘薯小象甲进行RNAi的方法及装置。

背景技术

甘薯小象甲是甘薯上危害最严重的世界性检疫害虫，在我国南方薯区，甘薯小象甲每年可产生数代，并可以在薯块内或野外越冬。由于甘薯小象甲世代重叠，幼虫在薯块内取食，成虫主要在傍晚和夜间活动，天敌少，成虫又具有短暂的迁飞能力，受害薯块有恶臭和苦味，不能食用和饲用，且能导致黑斑病、软腐病等病菌侵染而腐烂霉坏，造成甘薯产量和品质急剧下降，每年损失数百万美元。目前，对甘薯小象甲的应急防治主要以化学防治为主，但化学防治容易导致害虫的抗药性上升、甘薯上有害物质残留、害虫再猖獗及环境污染等问题，而且由于甘薯小象甲取食的隐蔽性等原因，很难取得很好的防治效果。此外化学农药在杀死害虫的同时，也会危及包括天敌在内的非靶标生物，不可避免的会给农田生态系统造成负面影响，导致生态防治功能得不到应有的发挥。因此，调整目前的甘薯小象甲防治策略对于防治甘薯病害具有重要意义。

RNAi (RNA interference)由外源双链RNA(dsRNA)介导的特定同源基因转录后RNA降解过程，是近年来分子生物学领域的一项重大发现。Napoli等向矮牵牛中导入更多拷贝与粉红色色素合成有关的基因导致花朵颜色变成白色或花白色。Guo等(1995)利用正义RNA(sense RNA)和antisenseRNA技术研究秀丽新小杆线虫的par-1基因功能时，发现了基因表达受到抑制的现象。RNAi不仅是研究基因功能的有力工具，同时在害虫防治方面也具有极大潜力。昆虫的RNA干扰方法，目前报道的有注射法、浸泡法、饲喂法等，这些干扰方法各有优缺点，根据不同种昆虫选择合适的dsRNA导入方法是成功实现昆虫RNAi的关键。注射法步骤较为繁琐，容易产生基因敲除的嵌合体模型，而且注射压以及由于注射造成的伤口不可避免地影响到昆虫正常的生理活动给基因功能的分析带来困难；浸泡法只适用于那些容易从溶液中吸收dsRNA的特殊昆虫细胞组织和特定发育阶段的昆虫。饲喂法操作简单方便，容易实现，对昆虫造成的侵害较小，不影响其他基因的表达。目前通过饲喂法进行RNAi广泛应用于各个目昆虫研究，如双翅目、半翅目、膜翅目、鞘翅目、等翅目、鳞翅目和直翅目。而饲喂法也有明显的缺点，存在作用效果慢、效率低等问题，且在卵期和蛹期等昆虫无法取食的时期不能进行。

发明内容

本发明的目的在于一种对甘薯小象甲进行RNAi的方法及装置，克服背景技术中提到的不足与缺陷。

为实现上述目的，本发明提供了一种甘薯小象甲RNAi装置，包括盒体和活动顶盖，所述盒体为底面封闭、顶部开口的中空圆柱体，为遮光体；所述活动顶盖位于所述盒体顶端，所述活动顶盖顶部由纱网构成，所述盒盖顶部设有加样孔、与加样孔匹配的孔盖。

优选的，上述甘薯小象甲RNAi装置中，所述纱网为80-100目，所述加样孔的直径为0.3-0.5cm。

一种对甘薯小象甲进行RNAi的方法，包括以下步骤：

（1）根据靶标基因的序列设计和合成dsRNA；

（2）取甘薯小象甲成虫置于权利要求1所述的甘薯小象甲RNAi装置中，盖上盒盖；

（3）将步骤（1）得到的dsRNA、乙二胺四乙酸与人工饲料混合得到饲喂材料，将饲喂材料通过加样孔加到盒体内底部，盖上孔盖；